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本研究克隆了vp26基因,分别采用原核表达载体pET30a(+)和真核表达载体pPIC9K,到相应的宿主菌E.coliBL21(DE3)和pichiapastorisGS115中进行表达,对两种个表达产物进行了纯化,并初步研究了最佳表达条件。
研究根据登录在GenBank的WSSV基因序列,设计了克隆引物VP26Csense和VP26Cantisense。从发病中国对虾中分离纯化了WSSV,提取病毒基因组,以基因组为模板,采用PCR方法克隆得到了WSSV囊膜蛋白基因vp26,并将其插入T载体,构建了pUCm-vp26C重组质粒。
用BMMG培养富集菌体,在BMMY诱导表达,24h后就达到了最大表达,表达量为11.7mg/L,占培养基上清总蛋白的85.7﹪。经硫铵沉淀浓缩和Ni-NTA亲和层析得到了电泳级纯的目的蛋白。