【摘 要】
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目的:通过抑制膀胱Cajal样间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)上的缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)与酪氨酸激酶受体蛋白(c-Kit)探究对膀胱收缩功能的影响。方法:80只雄性豚鼠随机分为空白对照组、Glivec(Imatinib mesylate,c-Kit抑制剂)组、Gap27(Cx43抑制剂)组和Glivec+Gap27组。四组豚鼠分
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目的:通过抑制膀胱Cajal样间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)上的缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)与酪氨酸激酶受体蛋白(c-Kit)探究对膀胱收缩功能的影响。方法:80只雄性豚鼠随机分为空白对照组、Glivec(Imatinib mesylate,c-Kit抑制剂)组、Gap27(Cx43抑制剂)组和Glivec+Gap27组。四组豚鼠分别于每日上午灌注生理盐水、Glivec(4μmol/L)、Gap27(26μmol/L)、Glivec+Gap 27,持续灌注2个月,每次灌注800μL。于灌注2月后行尿流动力学检测造模是否成功,收取新鲜膀胱组织,行体外肌条实验检测各组的肌肉收缩功能;免疫荧光检测c-Kit与Cx43在ICC细胞上的表达;qRT-PCR和Western blot法检测膀胱组织中c-Kit与Cx43的表达;电镜观察膀胱平滑肌超微结构变化。结果:尿动力学发现空白对照组膀胱容量(1.70±0.06 m L)、膀胱顺应性(0.12±0.04 m L/cm H2O)、残余尿(0.07±0.06 m L)、膀胱压力(15.24±1.18 cm H2O)。Glivec组膀胱容量(1.89±0.10 m L)、膀胱顺应性(0.18±0.05 m L/cm H2O)、残余尿(0.14±0.07 m L)、膀胱压力(10.17±0.62 cm H2O)。Gap27组膀胱容量(1.85±0.13 m L)、膀胱顺应性(0.17±0.07 m L/cm H2O)、残余尿(0.12±0.07 m L)、膀胱压力(9.89±0.69cm H2O)。Glivec+Gap27组膀胱容量(2.49±0.06 m L)、膀胱顺应性(0.49±0.08m L/cm H2O)、残余尿(0.65±0.14 m L)、膀胱压力(7.21±0.41 cm H2O)。Glivec组、Gap27组和Glivec+Gap27组较空白对照组的膀胱容量、膀胱顺应性及残余尿量明显增加(P<0.05);膀胱压力降低(P<0.05)。体外肌条实验发现在正常情况下空白对照组膀胱收缩频率(3.07±0.05次/min)和收缩张力(2.95±0.20 g);Glivec组膀胱收缩频率(1.6±0.06次/min)和收缩张力(1.54±0.15 g);Gap27组膀胱收缩频率(2.13±0.16次/min)和收缩张力(1.08±0.33 g);Glivec+Gap27组膀胱收缩频率(0.93±0.16次/min)和收缩张力(0.72±0.25 g)。Glivec组、Gap 27组和Glivec+Gap27在正常情况下膀胱收缩频率和收缩张力较空白对照组降低(P<0.05)。给予乙酰胆碱(ACH)后空白对照组膀胱收缩频率(6.0±0.14次/min)和收缩张力(6.79±0.26 g);Glivec组膀胱收缩频率(2.38±0.87次/min)和收缩张力(4.01±0.11 g);Gap27组膀胱收缩频率(2.96±0.08次/min)和收缩张力(2.87±0.31g);Glivec+Gap27组膀胱收缩频率(1.13±0.14次/min)和收缩张力(1.82±0.09 g)。加入ACH后Glivec组、Gap27组和Glivec+Gap27的收缩频率和收缩张力较正常组低(P<0.05)。免疫荧光提示c-Kit与Cx43在ICC细胞上共表达。通过抑制c-Kit后,豚鼠膀胱组织中的Cx43蛋白表达水平、mRNA表达水平低于空白对照组(P<0.05);抑制Cx43后,豚鼠膀胱组织中的c-Kit蛋白表达水平、mRNA表达水平低于空白对照组(P<0.05)。电镜发现同时抑制c-Kit与Cx43后膀胱平滑肌线粒体结构破坏。结论:Cx43和c-Kit在膀胱ICC上表达,二者可能共同参与调控膀胱收缩功能。抑制Cx43和c-Kit后可能破坏了膀胱平滑肌的线粒体,影响其功能,进而影响膀胱收缩功能。
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