参芎葡萄糖注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用研究

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目的:缺血再灌注损伤指的是造成组织损伤的原因,不仅是缺血本身,还和缺血区域血流恢复供应之后,大量的自由基或者其他的一些损伤因素对这部分区域内的组织造成的损伤。脑组织缺血再灌注(CIR)是缺血性脑卒中的一个重要的病例过程。中医中药治疗缺血性脑卒中已有几千年的历史,为了是中医中药更广泛的应用于临床,近年来,大量的中成药在市面上出现,参芎葡萄糖注射液就是其中之一。据大量的研究证明,参芎注射液治疗缺血性脑卒中取得了良好的效果,并且有研究结果证明该药可以抑制CIR造成的炎症损伤,但是,关于其作用机制的研究还为数甚少。TLR4/MyD88/NF-κB已被证明为脑组织的炎症反应信号通路之一,本实验以大鼠为研究对象,研究参芎注射液是否是通过抑制此信号通路来抑制CIR造成的脑组织的炎症损伤;方法:选择雄性SD大鼠120只,分成三组,分别为:假手术组(不进行大脑中动脉的栓塞,余手术操作同其他两组)、模型组(进行大脑中动脉的栓塞,待脑组织缺血2小时后,恢复血流灌注)、给药组(手术操作同模型组),给药方案为:分别在恢复血流灌注后立即、24小时、48小时的时候对给药组大鼠腹腔注射参芎注射液,而模型组和假手术组在与给药组相同的给药时间点腹腔注射同等剂量的氯化钠注射液,给药计量根据相应的计算公式算出,在最后一次给药6小时后,立即观察大鼠的行为,用Zea longa评分法对大鼠进行神经功能缺损的评分,然后,取各组大鼠的脑组织的大脑皮质部分进行各种指标的检测,分别用TTC染色法检测各组大鼠脑组织的梗死的体积,用westernblot的方法检测大鼠脑组织中TLR4、MyD88的蛋白含量,用免疫组化的方法检测大鼠脑组织中NF-κB活化的程度,用ELISA试剂盒检测大鼠脑组织中TNF-α的蛋白含量;结果:假手术组大鼠的Zea longa评分为0分,给药组大鼠的Zea longa评分明显低于模型组,并且两组之间差异具有统计学差异(P<0.05);假手术组大鼠无脑梗死,给药组大鼠的脑梗死体积明显小于模型组,两组之间差异具有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠脑组织中TLR4、MyD88的含量明显高于假手术组,而给药组大鼠脑组织中TLR4、MyD88的含量明显低于模型组,两对比较组间差异均具有统计学意义(P<0.05);假手术组大鼠的脑组织中未见活化的NF-κB,而模型组大鼠脑组织中活化的NF-κB明显比给药组的多,且两组之间的差异具有统计学意义;模型组的大鼠的脑组织中TNF-α的含量明显高于假手术组,而给药组则明显低于模型组,且两对比较组间差异均具有统计学意义(P<0.05);结论:在CIR时,由TLR4介导的炎症信号通路(TLR4/MyD88/NF-κB)被激活,并且TLR4及MyD88的蛋白表达量均增加,应用参芎注射液治疗之后,脑组织中的TLR4、MyD88的蛋白含量减少,NF-κB的活化程度和TNF-α的含量也随之降低,从而,CIR引起的炎症反应也明显减轻,说明参芎注射液通过抑制TLR4和MyD88的表达来抑制NF-κB的活化以及下游炎症因子的产生,以达到减小炎症反应的损伤程度的目的。
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