主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为一类与免疫应答密切相关的基因群，主要参与抗原的呈递作用。其中MHCI类基因α链的抗原结合部位，是变异最大的区域，与疾病的抗性密切相关。近些年来，由于自然环境变化和其他人为因素，两栖类动物的种群数量呈逐年下降趋势，甚至某些物种的数量已经处于濒临灭绝的边缘，微生物感染是其中的重要原因之一。研究MHC基因在抗感染中的作用已经成为两栖类抗病研究的热点内容。
　　本研究以东北林蛙为主要研究对象，黑龙江林蛙为对比物种，克隆两种蛙MHCI类基因α链全长编码区，通过生物信息学软件分析MHCI类基因特性；同时构建MHCI基因肽结合区的重组原核表达载体，制备多克隆抗体；再采用嗜水气单胞菌和LPS进行胁迫，利用实时荧光定量PCR技术分析MHCImRNA转录情况；再通过HE染色法和免疫组织化学法观察东北林蛙病理学变化及蛋白表达情况，为两栖类MHCI类基因的免疫功能研究提供理论基础。主要研究结果如下：
　　(1)本研究克隆东北林蛙和黑龙江林蛙的MHCIα基因全长编码区，获得编码区长度均为1047bp，编码348个氨基酸。两种林蛙核苷酸和氨基酸同源性分别为88.7%和97%；东北林蛙有1个糖基化位点，33磷酸化位点，而黑龙江林蛙有3和19个；二者均含有一个IGc1功能域；进化关系表明，东北林蛙、黑龙江林蛙与中国林蛙的同源性最高，与哺乳类和禽类亲缘关系最远。
　　(2)本研究构建了东北林蛙MHCI基因α链肽结合区的重组表达载体，诱导的重组蛋白大小为39kD，免疫家兔后获得多克隆抗体效价为1:20000。
　　(3)采用实时荧光定量PCR技术检测，正常生理情况下MHCI类基因在东北林蛙和黑龙江林蛙各组织中均表达，但在脾脏中具有较高的表达量。
　　(4)在嗜水气单胞菌和LPS胁迫下，东北林蛙和黑龙江林蛙肺脏、肾脏、脾脏和皮肤的MHCI类基因转录水平都偏高，而在肝脏和肌肉组织中MHCI类基因对LPS的响应更为积极。在嗜水气单胞菌感染模型中，东北林蛙肝脏、脾脏和皮肤在6h到达峰值，肺脏和肌肉组织中在12h达到峰值，而肾脏组织则在24h时达到峰值；黑龙江林蛙肝脏、脾脏、皮肤和肌肉中MHCImRNA在6h就出现了最高峰，而在肺脏和肾脏中的峰值分别出现在感染后12h和24h。在LPS感染模型中，东北林蛙MHCI基因在被检组织中均呈现上调表达，其肺脏和皮肤在12h达到峰值，肝脏和脾脏分别在24h和48h达到最高峰，而肾脏和肌肉组织均在72h达到峰值；黑龙江林蛙肝脏和肌肉组织中MHCImRNA分别在6h和12h达到最高峰，肾脏和皮肤组织在24h达到峰值；脾脏和肺脏中的峰值分别出现在48h和72h，而在心脏组织中两种蛙MHCI基因整体转录水平较低。
　　(5)经HE染色显示，在嗜水气单胞菌和LPS胁迫下会导致东北林蛙肝脏、皮肤和肌肉组织随着感染时间延长，细胞损害加剧。免疫组织化学结果显示，与对照组相比，感染嗜水气单胞菌和LPS后东北林蛙肝脏、皮肤和肌肉出现了更多的棕黄色阳性颗粒，其中嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙肝脏和皮肤在6h就出现较多棕黄色颗粒，而肌肉组织在12h才出现阳性颗粒明显增多的现象；LPS胁迫下东北林蛙肝脏、皮肤和肌肉MHCI蛋白表达量分别在24h、12h和72h为最高。
　　本研究对东北林蛙和黑龙江林蛙MHCIα基因进行克隆，对东北林蛙MHCI肽结合区进行原核表达并制备多克隆抗体；对嗜水气单胞菌和LPS胁迫下两种林蛙MHCI在不同组织中的变化规律进行了分析。本研究为两栖类MHCI基因的免疫功能研究提供了理论依据，同时也为两栖类进化、传染病抗性等问题的研究提供新的思路。