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目的：脑出血是临床常见病和多发病,以其高死亡率和高致残率严重威胁人类生命健康,给患者和家人带来沉重的痛苦,也给社会带来一系列负担。国家“十一五”计划也将脑血管病预防列为重大项目。研究发现,脑出血后脑组织存在广泛的局部血流量降低和缺血性损害,这种继发性损害对脑出血的预后起重要作用。血管内皮生长因子(VEGF)是一种具有肝素活性的生长因子,能诱导内皮细胞增殖、参与新生血管形成、抑制细胞凋亡等,在生理性(胚胎形成过程中的血管发育)和病理性血管新生(创伤愈合、炎症、肿瘤及缺血缺氧等诸多病理过程)中起重要作用。本研究旨在(1)建立大鼠脑出血的动物模型,在此基础上对脑出血大鼠进行行为学评分。(2)观察脑出血脑组织病理学改变。(3)脑出血后神经细胞胀亡时程表达变化。(4)VEGF在出血灶周脑组织中的细胞定位和动态表达。(5)分析脑出血后VEGF表达与神经细胞胀亡的相关性。从而探讨VEGF的表达在脑出血后继发性脑组织损伤及修复中的作用,为临床治疗脑出血提供理论依据。
方法：应用脑内立体定向仪,采用二步法自体血注入制备大鼠脑出血模型。Wistar大鼠48只,随机分为脑出血组和对照组,脑出血组36只将大鼠自体血50ul注入右侧尾状核,分别于6h、24h、2d、3d、5d、7d后处死,每个时间点6只。对照组12只将等量生理盐水注入相同部位,分别于上述时间点处死,每个时间点2只。在大鼠处死前均进行行为学评分；光镜下观察HE染色脑出血灶周病理变化；电镜下观察胀亡细胞形态学变化并计数；免疫组织化学染色显示脑内VEGF表达变化；显微镜下计数脑内VEGF表达阳性的细胞。
结果：(1)采用二步法自体血注入可成功制备稳定的脑出血动物模型。(2)脑出血后在不同时间点Rosenberg评分明显高于对照组,P<0.001。(3)电镜下观察可见脑出血后存在神经细胞胀亡,脑出血组OI明显高于生理盐水组,P<0.001。(4)脑出血组VEGF主要表达在神经元、小胶质细胞和内皮细胞。且阳性细胞数随时间逐渐增多,与对照组相比有显著意义,P<0.001。随着出血时间延长,表达VEGF的内皮细胞数量逐渐增多,7d内皮细胞肥大,染色较深,存在较多微血管和血管样结构。(5)脑出血后VEGF的表达与胀亡细胞表达呈负相关,胀亡细胞表达与行为学评分呈正相关。
结论：(1)本研究采用立体定向技术二步法可成功制备稳定的大鼠尾状核脑出血模型。(2)脑出血后诱导神经细胞胀亡,并与行为学改变一致,表明胀亡可能参与了脑出血后继发性损伤。(3)脑出血灶周VEGF的表达增加,7d达高峰,但主要在血管内皮细胞表达,提示VEGF可诱导新生血管的生成,对脑出血后继发性缺血性损伤起修复作用。(4)VEGF的表达与胀亡指数呈负相关,提示VEGF参与了脑出血后的损伤修复。