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【目的】研究福建省乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)相关肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中TP53(P53)、CTNNB1及CDKN2A(P16)基因的突变情况、蛋白表达及其与临床病理特征的关系,以期寻找它们是否具有与HBV相关HCC的特征性分子诊断位点;研究福建地区HBV相关HCC患者HBV基因型特点,建立本地区HBV相关HCC的流行病学调查资料。在分子生物学水平探讨HBV基因型与HCC的关系,从而为HCC的早期发现、早期诊断和综合治疗奠定基础。【方法】1.对福建省HBV感染相关HCC、癌旁肝组织各130例以及HBV阴性HCC组织30例,通过PCR联合直接测序法检测基因外显子(Exon)序列,包括P53 exon5~8、CTNNB1 exon3、P16 exon 1~3,分析基因异常改变情况及其临床病理学意义。2.免疫组织化学染色法检测p53、β-catenin、p16蛋白在HBV感染相关HC C、癌旁肝组织、HBV阴性的HCC组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义。3.运用特异性引物巢式PCR法检测福建省HBV感染相关的HCC中HBV基因分型的情况,分析其流行病学特点,并比较HBV基因型与P53基因突变及表达情况的关系。【结果】1.P53 exon5~8测序结果显示:共检测出52例(17.9%)突变,其中50例在HBV感染相关HCC组织,2例在HBV阴性的HCC组织,癌旁组织未发现突变。HBV感染相关HCC中P53基因突变率(38.4%)高于HBV阴性的HCC组织(6.6%)(P<0.05)。P53 exon7第249密码子发生点突变的频率最高(35/52),且主要发生于HBV感染相关HCC组织,包括AGG→AGT(28/35)、AGG→ATG(7/35)。此外,P53exon7第259密码子检测出GAC→AAC突变(8/52)、第258密码子检测出GAA→GAT突变(3/52)、第248密码子检测出CGG→CAG突变(3/52)、第251密码子检测出ATC→AAC突变(1/52)、第244密码子检测出GGC→GGT突变(1/52),其中259密码子突变例数高于其它相关研究报告例数,244密码子突变此前我国未见报道。P53 exon5第132密码子检测出AAG→AAT突变(1/52),P53 exon6、P53 exon8未检测到突变。分析P53 exon7突变与临床病理指标的关系发现中、低分化HCC组织中突变率高于高分化(P<0.05)即随着P53 exon7的突变率增加肿瘤分化程度也越低。2.CTNNB1 exon3测序结果显示:共检测出11例(3.7%)突变,且均在HBV感染相关HCC组织,癌旁肝组织及HBV阴性的HCC组织未发现突变。CTNNB1 exon3第37密码子发生点突变TCT→TAT的频率最高(9/11)。此外,CTNNB1 exon3第35密码子检测到ATC→AAC突变(2/11)。3.P16 exon 1~3测序结果显示:共检测出2例(0.7%)突变,且均在HBV感染相关HCC组织中,癌旁肝组织及HBV阴性的HCC组织未发现突变。P16 exon1第104密码子发生GGC→TGC突变,P16 exon3第251密码子检测出1例GGG→CGG突变,P16 exon1未检测出到突变。4.PCR扩增法检P16 exon 1~3过程中发现分别有13例(4.4%)、51例(17.5%)、1例(0.3%)出现外显子缺失,P16 exon 1和P16 exon 2在HBV感染相关HCC及HBV阴性HCC组织中的缺失率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。5.免疫组织化学染色结果显示:p53蛋白在HBV相关HCC中阳性表达率为56.1%(73/130),明显高于癌旁组织13%(17/130)(P<0.05),而与HBV阴性的HCC 43.3%(13/30)无明显差异(P>0.05)。p53蛋白表达在HCC复发、脉管癌栓、Edmondson分级之间差异具有统计学意义(P<0.05),p53蛋白阳性率复发患者高于未复发患者、HCC伴脉管内癌栓患者高于无脉管内癌栓患者、HCC中低分化患者高于高分化患者;β-catenin蛋白在HBV相关HCC中阳性表达率为58.4%(76/130)明显高于癌旁组织18.4%(24/130)(P<0.05),而与HBV阴性的HCC 46.6%(14/30)无明显差异(P>0.05)。β-catenin蛋白表达在HCC复发、Edmondson分级、脉管癌栓之间差异具有统计学意义(P<0.05),β-catenin蛋白阳性率复发患者高于未复发患者、HCC伴脉管内癌栓患者高于无脉管内癌栓患者、HCC中低分化患者高于高分化患者;p16蛋白在HBV相关HCC阳性表达率为49.2%(64/130),明显低于癌旁组织70%(91/130)(P<0.05),而与HBV阴性的HCC 43.3%(13/30)无明显差异(P>0.05)。p16蛋白表达在HCC复发、Edmondson分级之间差异具有统计学意义(P<0.05),p16蛋白阳性率无复发患者高于复发患者、HCC高分化患者高于中低分化患者。6.HBV基因分型结果显示:共检测出B、C、B/C三种基因型,分别占73.8%(96/130)例、22.4%(29/130)例、3.8%(5/130)例,未发现其他基因型。分型在B型、C型、B/C混合型之间存在明显差异(P<0.05)且HBV不同基因型与年龄、HBV DNA病毒载量水平有密切关系(P<0.05)。在发生P53基因突变的病例中基因分型无明显差异(P>0.05)而C型、B/C混合型的p53蛋白阳性表达率高于B型,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】1.福建省HBV感染相关HCC中P53基因常有突变发生,且以P53基因第7外显子第249密码子为其突变热点。2.HBV感染可能使P53基因突变发生率增高,导致HCC的发生。3.P53、CTNNB1基因的过表达可能与P53、CTNNB1基因的突变有关,而P16基因的表达下调原因之一可能是由于P16基因缺失。4.福建省HBV基因型以B、C型为主,以及少量的B/C混合型,其中B型数量最多。5.HBV基因C型的p53蛋白表达阳性率明显大于B、B/C基因型,即p53蛋白的表达与基因分型有关。