HepG2细胞内HPVDNA整合状态及L1蛋白表达观察

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目的:了解人肝癌细胞株Hep G2细胞内人乳头瘤病毒(HPV)基因组的整合状态,探讨电镜观察下Hep G2细胞胞质内包涵体物质的性质,了解Hep G2细胞内L1蛋白表达规律而进行本研究。  方法:(1)培养Hep G2细胞、HPV18阳性细胞HeLa及HPV阴性细胞HaCaT,提取三种细胞的总DNA、总mRNA及细胞总蛋白。(2)用提取的细胞总DNA做HPV18 E2、E6的PCR扩增,判断Hep G2细胞内人乳头瘤病毒(HPV)基因组的整合状态。(3)对提取的细胞蛋白用ELISA方法检测细胞中L1蛋白表达。(4)应用多价小鼠抗HPV L1单克隆抗体(可检测HPV1、6、11、16、18、31等型别)以免疫印迹实验(Western Blotting)方法以及光镜和电镜的免疫组织化学方法对人肝癌细胞株Hep G2细胞中L1蛋白表达情况进行检测。(5)对提取的细胞RNA用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞内L1 rnRNA表达。  结果:(1)PCR显示Hep G2细胞内HPV DNA基因组呈整合状态。(2)ELISA检测结果证实Hep G2细胞中有L1蛋白的表达。(3)免疫印迹实验(Western Blottig)方法检测结果显示Hep G2细胞和HeLa细胞一样在56KD处出现HPV L1蛋白条带;光镜及电镜免疫组织化学法检测Hep G2细胞胞浆内均出现HPV L1蛋白阳性反应。(4)通过HPV L1的通用引物MY09/11、GP5+/6+引物对Hep G2细胞的mRNA进行RT-PCR扩增结果为有L1 mRNA表达。  结论:Hep G2细胞是HPV18阳性细胞,HPV DNA基因组在Hep G2细胞内呈整合状态。在蛋白水平和mRNA水平证实了Hep G2细胞内有HPV L1的表达。L1作为HPV所致肝癌的肿瘤标志物,用于肿瘤治疗和预后判定均具有潜在的价值。
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