ITGB1在食管癌进展中的功能及机制研究

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目的了解慢病毒感染技术下调食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞中整合素β1(Integrin β1,ITGB1)的表达情况,探索ITGB1对ESCC细胞侵袭转移以及化疗抗性的影响。方法采用实时荧光定量 PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)在29例ESCC患者癌组织以及匹配的癌旁组织中检测ITGB1的表达情况,并在多种ESCC细胞系中检测ITGB1的mRNA水平表达量。将携带目的基因ITGB1的慢病毒载体以及对照慢病毒载体感染ESCC细胞并检测ITGB1基因的敲降效率。Transwell和划痕实验测定ITGB1对ESCC细胞的侵袭及迁移能力的影响。通过尾静脉肺转移模型和腘窝淋巴结转移模型,探索ITGB1对ESCC细胞转移的影响。采用流式细胞术检测ITGB1对ESCC细胞凋亡以及化疗抗性的影响。通过腹腔注射顺铂(cis-platinum,DDP),观察ITGB1对裸鼠皮下移植瘤化疗抗性的影响。通过免疫组化技术(Immunohistochemistry,IHC),探索ITGB1的表达水平与临床参数之间的相关性。采用蛋白免疫印迹技术(western blot)检测ITGB1和FAK信号通路之间的联系。结果与癌旁组织相比,癌组织中的ITGB1 mRNA水平明显上调。两个GEO数据GSE23400和GSE20347统计结果证明ITGB1在恶性食管癌组织中的表达明显提升。免疫组化结果显示癌组织中ITGB1蛋白表达水平明显高于正常组织。ITGB1的高表达与淋巴结转移和临床分期相关。在体外实验中,ITGB1的缺失抑制ESCC细胞的运动性。在体内实验中,敲降ITGB1显著抑制ESCC细胞的转移。ITGB1的敲降通过抑制FAK-Rac1通路削弱ESCC细胞的运动能力。与对照组相比,ITGB1的缺失能增加ESCC细胞对DDP的敏感性。结论ITGB1促进ESCC细胞的浸润转移以及增强细胞的化疗抗性,为临床治疗食管癌提供一个新型靶点。
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