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目前，肝移植已成为治疗终末期肝脏疾病的唯一有效手段,急慢性排斥反应仍是临床器官移植中难以克服的问题。长期应用免疫抑制剂已经带来许多致命的副作用。为减少免疫抑制剂的使用剂量和时间,降低毒副作用并延长移植受体的存活时间,国内外学者作了大量实验研究。本实验拟通过转基因技术,将PAG(T细胞活化的关键的负性调节蛋白)的编码基因用纳米材料PEG-PEI共聚物,并负载超顺磁性氧化铁(SPIO)包裹,在CD3抗体的介导下,导入到T细胞内并表达,在体外及体内实验上观察PAG的负性调节蛋白作用,以期延长大鼠原位肝移植存活,并为诱导免疫耐受及临床器官移植提供理论依据。
1.探讨了大鼠PAG蛋白真核质粒的构建。将PAG蛋白克隆基因片断,经定向插入到空载体pcdna3.1-(-)-C-3xflag和pcmv-3xflag-N中,成功的构建了大鼠PAG蛋白高表达的真核质粒,为研究PAG在体外细胞、体内肝移植模型上移植免疫排斥,打下实验基础。
2.运用纳米材料PEG-PEI共聚物,并负载超顺磁性氧化铁(SPIO),在CD3抗体的介导下,靶向性地导入到T细胞内并表达,在体外观察转染效率,测量mRNA及蛋白的表达,以及转染后对T细胞的抑制作用。
3.应用lewis及BN大鼠成功建立了肝移植的动物模型,拟为后续的PAG蛋白的体内实验打下基础。