人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是全球普遍感染的一种疱疹病毒,也是引起胎儿先天性畸形和器官移植受者死亡最常见的病原体。基于社会、经济负担以及缺乏有效治疗方案,HCMV已被指定为最优先的疫苗目标之一,其中和抗体的研发能为预防或治疗性HCMV疫苗的制备奠定基础。g H（glycoprotein H）由HCMV UL75基因编码,基因全长2 232bp,编码742个氨基酸。g H与g B、g L构成了HCMV的核心融合机制,在HCMV感染宿主细胞的过程中起着关键作用,是诱导机体产生免疫应答的主要靶点。有研究表明,g H是人巨细胞病毒的主要中和性抗原,特异性抗g H抗体具有中和HCMV和阻断病毒在细胞间传播的潜力。本实验旨在制备针对g H蛋白的特异性单克隆抗体。以含人巨细胞病毒临床株Toledo全基因组的BAC为模板,扩增去除信号肽和跨膜区的g H基因片段,后者全长2 064 bp,编码688个氨基酸。扩增的g H基因片段经胶回收纯化后插入表达载体,构建p ET32a’-g H重组表达质粒。将序列鉴定正确的重组质粒转化进入表达菌株Trans B,经IPTG成功诱导表达了78 k D的重组g H蛋白,g H蛋白主要以包涵体的形式进行表达。大量表达重组蛋白,经包涵体洗涤、尿素变性、电洗脱纯化等步骤获得纯度较高的g H蛋白。利用纯化的重组g H蛋白免疫8周龄BALB/c雄鼠,每次免疫的蛋白剂量为150μg/只,每次免疫前一天利用间接ELISA检测小鼠血清效价。经过五次免疫后,小鼠血清效价达1:100 000,提示表达的g H蛋白具有良好的免疫原性。在无菌条件下收集小鼠脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经过四次亚克隆筛选,最终获得5株可稳定分泌抗g H单克隆抗体的细胞株,分别命名为8A9、8B4、8C4、8D9、8D12。所获5株单克隆抗体对g H蛋白均具有良好的反应性,其中8A9、8C4、8D9具有较高的亲和力,8D9和8D12具有较强的病毒捕获能力。本研究获得了具有自主知识产权的抗g H单克隆抗体,抗体具有良好的病毒捕获能力,可为开发预防或治疗HCMV感染的中和抗体奠定基础。