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荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)是一种广泛存在于土壤中的革兰氏阴性细菌,具有生物防治、促进植物健康和引起植物病害等多重功能特性。本研究对猕猴桃溃疡病相关的致病性荧光假单胞菌株AHK-1进行全基因组测序与分析,通过比较基因组学、毒力因子预测等方法,探寻与植物病害相关的荧光假单胞的致病因子。通过同源重组法构建候选致病相关fliG基因的缺失突变菌株及互补菌株,对fliG基因在致病性荧光假单胞AHK-1菌株中的生物学功能进行了初步分析。主要研究结果如下:1.荧光假单胞AHK-1的全基因组测序本研究利用Illumina HiSeq 2500测序平台对荧光假单胞AHK-1进行了全基因组测序,并进行了人工组装和注释,获得了由50个scaffold组成的大小为7,035,786 bp的全基因组序列(GeneBank登录号:QRBA00000000),GC 含量为 60.88%,最大的一个 scaffold 是 626.42 kb,N50 大小为331.26 kb,共预测到蛋白编码基因6327个,4个rRNA操纵子,58个tRNA。2.荧光假单胞AHK-1的比较基因组学分析将AHK-1全基因组序列与选取自GeneBank数据库中已经公布全基因组序列的荧光假单胞菌株GcM5-1 A和SBW25的全基因组序列进行比较基因组学分析。直系同源基因分析结果表明3个菌株共有核心基因簇(core-genome)3998个,菌株AHK-1特有的基因簇有946个。本研究选取了包括AHK-1菌株在内的共19株荧光假单胞菌进行多位点(acsA,aroE,guaA,gyrB,mutL,ppsA,pyrC,recA,rpoB)序列分析结果表明,19个菌株共分为两个亚支,其中菌株AHK-1与其中的16株荧光假单胞菌株紧密的聚类成一簇。3.候选致病相关fliG基因的功能分析通过同源重组法构建了菌株AHK-1的fliG基因缺失突变菌Δ fliG和功能互补菌株C-fliG,并对获得的菌株进行生物学试验分析。结果表明,与野生型荧光假单胞菌AHK-1相比,突变株ΔfliG游动性运动和集群性运动能力显著降低,产生胞外多糖减少,生物膜形成能力降低,而互补菌株C-fliG基本能恢复到野生菌水平。接种盆栽猕猴桃植株的嫩枝后,ΔfliG对猕猴桃的致病力减弱,而野生型菌AHK-1和互补菌株C-fliG对接种枝条表现出较强的致病性。这表明鞭毛相关基因fliG对荧光假单胞AHK-1的运动性、胞外多糖和生物膜形成能力和对猕猴桃的致病性等均有调控作用。