论文部分内容阅读
农药氟虫腈对生物体具慢性神经毒性,对生态环境具潜在的危险性。研究表明,miRNA在农药等化学物质作用下,其表达发生改变,进一步与靶基因碱基互补配对,调控基因表达。实验室前期的研究表明,用三唑磷微乳剂、氟虫腈微乳剂及其混合物分别处理斑马鱼后,包括miR-155、miR-99在内的21条miRNA的表达发生改变。miR-155是一个典型的多功能miRNA,miR-155参与血细胞生成、炎症和免疫等多种生物学过程。因而通过实验分析不同浓度氟虫腈等农药处理后,miRNA和相关靶基因在核酸和蛋白水平的表达,有助于明确miR-155和相关靶基因在外源化学物质毒理学效应中的作用与关系。本论文以dre-miR-155为研究对象,通过生物信息学分析,对其靶标进行预测,结合互补“种子”序列、结合的自由能以及各数据库中的排位等因素,选取miR-155潜在靶基因UHRF1为研究对象。UHRF1基因表达可促进乳腺癌细胞B-549的生长,且UHRF1蛋白在甲基化的调控过程、癌症的表观遗传学机制等生物学过程中具有重要作用。本实验将斑马鱼分成8组,一组为空白对照,一组为溶剂(万分之一DMSO)对照,其余6组斑马鱼分别用不同浓度氟虫腈处理。采用荧光定量PCR技术研究miR-155及其潜在靶基因UHRF1在氟虫腈处理前后的表达变化情况,结果表明,miR-155表达上调,则UHRF1表达下调,反之则上调。通过蛋白含量测定、Western blot及相关数据分析UHRF1蛋白处理前后表达情况,结果表明UHRF1蛋白表达量随miR-155表达的增加而减少。因此,miR-155可能对UHRF1蛋白的表达有负向调控作用。本实验通过分析miR-155和UHRF1的转录水平与UHRF1在蛋白水平的表达的相关性,从核酸量、基因和蛋白水平研究miR-155对基因UHRF1的调控作用,对miR-155潜在靶基因UHRF1进行实验验证。这将丰富miRNA作为生物标记物来检测化学物质对环境影响的研究,同时为miRNA调控基因的表达以及在动物中的调控模式提供佐证,而miR-155对UHRF1的调控作用的证实将在一定程度上推动毒理学等领域的相关研究。