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猪肠道疾病是全球养猪业的主要威胁,已造成重大的经济损失。包括传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)和猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在内的多种冠状病毒,已确定为猪肠道疾病的主要病原体,但对于这些疾病的防控依然缺乏有效手段。TGEV和PEDV的宿主细胞是小肠绒毛上皮细胞,存在于该细胞表面中的氨肽酶N(Aminopeptidase-N,APN)可能是TGEV和PEDV进入细胞的受体。目前关于TGEV和PEDV与APN之间互作关系的研究主要集中在细胞水平上,并且APN是否是PEDV的细胞受体依然存在争议。因此,本研究着重于APN基因编辑仔猪是否具有抗TGEV和PEDV感染的能力,以此来探讨APN在病毒感染中的作用,从而为抗病育种提供一些参考。首先,本研究利用CRISPR/Cas9n基因编辑系统,通过细胞转染,并结合流式细胞仪筛选出GFP表达的细胞,通过细胞培养获得单克隆细胞系,随机挑选19个单克隆,其中16个为APN双等位基因编辑,编辑效率为84.3%,基因编辑形式包括DNA碱基的缺失、插入和错配。其次,本研究以APN基因编辑细胞为供体细胞进行体细胞核移植,重构胚胎能够正常发育,APN基因缺失并不会导致胚胎致死;将核移植胚胎移植到代孕母猪体内,受体母猪妊娠率与已报道体细胞核移植胚胎的妊娠率相当;最终产下21头APN基因编辑仔猪,其中8头由于出生体重过低在2天内死亡,APN基因编辑仔猪并无明显的生理缺陷,成活仔猪身体健康,经测序和蛋白免疫印记鉴定显示剩余13头仔猪全部是APN双等位基因编辑猪,并且未检测到APN蛋白表达。最后,本研究将成活的13头仔猪分两组进行TGEV和PEDV感染实验,在感染TGEV后,APN基因编辑仔猪对高毒性TGEV毒株具有较强的抵抗力;组织病理学分析显示APW基因编辑仔猪小肠绒毛完整,而野生型仔猪则出现典型病变,免疫组化结果显示APN基因编辑仔猪的小肠内未检测出TGEV抗原。然而,在感染PEDV后,APN基因编辑仔猪死亡率为100%,组织病理学和免疫组化分析均显示APN基因敲编辑猪感染PEDV后与野生型仔猪并无明显差异。综上所述,本研究证明APN编辑对猪胚胎及胎儿发育并无影响,APN编辑的新生仔猪可以抵抗TGEV的感染,却无法抵抗PEDV的感染。该研究结果利用动物体内试验说明了 APN对于TGEV的感染是必需的,但PEDV可能存在其它的细胞表面受体,此外,本研究也丰富了抗病毒研究的手段,为今后的抗病育种提供一定的参考案例。