植物广泛分布在自然界,与人们的生活息息相关。但植物自身的化学成分复杂,其中有很多具有毒性,因治疗不当、误食、他杀和意外所致的中毒案件时有发生。由于植物中所含有毒成分复杂多样、毒性大、在中毒者体内含量低、代谢迅速且中毒无特异性临床表现等问题,使复杂生物体系中相关目标物的检测与评价成为法医毒物分析的技术难题。雷公藤是我国重要的天然药物资源,且是近半个世纪以来发生中毒事件最多的中草药之一,其毒性在传统中草药中排名第三。随着雷公藤的临床应用范围越来越广,其毒副作用也越来越受到人们的关注。雷公藤甲素是从雷公藤中分离得到的二萜类内酯,是雷公藤的主要有效成分之一,也是引起毒副作用的主要成分;雷公藤酯甲为雷公藤中的三萜类成分,也具有明显的毒副作用。而夹竹桃是一种因其毒性而闻名的具有观赏价值的中草药。欧夹竹桃苷是存在于夹竹桃中的主要有毒成分,属迟效强心苷类物质,有较强的致吐作用。由于雷公藤和夹竹桃毒性较大,与此相关的中毒案件时有发生。此外在司法鉴定实践中还经常遇到摄入未知有毒生物碱导致中毒甚至死亡的案件。雷公藤、夹竹桃及多种有毒生物碱的相关研究在法医毒物鉴定中涉猎较少,仅见零星报道,且现有报道的检测方法不能满足体内痕量、快速及多目标物同时分析的需求,对于相关毒代动力学的研究、分析结果的评价和判断也仍存在一定的局限性,不够全面。因此建立可靠、准确、快速及灵敏的生物检材中相关目标物的筛选与检测体系,继而研究相关的毒代动力学特征,对于该类案件的法医学鉴定及评判极为重要。本论文拟通过分别开发、建立简便、灵敏、准确的复杂生物体系中雷公藤、夹竹桃及常见有毒生物碱的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析方法以及开展以大鼠为中毒动物模型的雷公藤甲素毒代动力学研究,将其研究成果应用到司法鉴定实践中,为临床诊治、法医鉴定提供取材指导以及相应的技术保障和评价依据。本论文的研究内容共分为四章。第一章为雷公藤的中毒、检测及毒代动力学研究。本章分为两个研究部分,第一部分首创了多种生物检材中痕量雷公藤甲素及雷公藤酯甲的液液提取高效液相色谱串联质谱(LLE-LC-MS/MS)的同时检测法,并进行了全面、系统的方法学验证。本方法以纳洛酮为内标,检测时间为10 min。血液、尿液及组织中雷公藤甲素、雷公藤酯甲及内标纳洛酮三种物质分离良好。目标物在5-500 ng/m L(ng/g)内均有良好的线性,相关系数﹥0.9950,最低检出限均为2 ng/m L(ng/g),回收率均大于60%,基质效应为82.06%-107.43%,方法的准确度为90.61%-105.80%,日内精密度与日间精密度的相对标准偏差均小于15%。该方法解决了生物检材中痕量雷公藤甲素及雷公藤酯甲的定性定量问题,适用于雷公藤中毒的法医毒物分析和临床药物监测。第二部分建立了雷公藤主要有效及毒性成分-雷公藤甲素的大鼠中毒实验模型。通过动物实验,考察灌胃给予大鼠毒性剂量的雷公藤甲素后,雷公藤甲素在大鼠体内的药时曲线、组织分布及排泄特征。结果表明在本研究的给药剂量下,雷公藤甲素在大鼠血液中的浓度随时间的变化趋势符合一级动力学消除的二室模型,三个毒性剂量内仍呈现出线性动力学性质,血药浓度随着给药剂量的增加而增加;各组织浓度在不同时间点的变化规律均为:5min﹥15min﹥60min,其中肝、肾组织中浓度较高,可作为检案取材参考;药物在粪便中排出量较大,推测雷公藤甲素大部分以原药形式排出体外。大鼠对雷公藤甲素的吸收存在一定的个体差异,但无显著的性别差异。研究结果可对雷公藤中毒相关案例的鉴定及评价提供指导信息和参考依据。第二章为夹竹桃的中毒、检测及评价。建立了多种生物检材中夹竹桃主要毒性成分欧夹竹桃苷的LLE-LC-MS/MS分析方法,并进行了全面、系统的方法学验证。本方法使用外标法,血液和肝组织中欧夹竹桃苷在5-500 ng/m L和20-2000 ng/g范围内均呈现出良好的线性,相关系数﹥0.9950,最低检出限分别为1 ng/m L和2ng/g。回收率均大于70%,基质效应为91.52%-106.39%,方法的准确度在91.07%-111.63%,日内精密度与日间精密度的相对标准偏差均小于12%。本方法成功应用于夹竹桃中毒死亡案件的鉴定,且经文献检索及线性离子阱-静电场轨道阱质谱(LTQ-Orbitrap-MS)技术对分子式的测定,在多种检材中均检测推断出欧夹竹桃苷的代谢物欧夹竹桃苷元。本方法中欧夹竹桃苷和欧夹竹桃苷元得到了良好的分离。方法灵敏度高、选择性好、简便快速,适用于夹竹桃中毒案件的法医毒物分析和临床诊断。第三章为LC-MS/MS法同时筛选血液中的45种有毒生物碱及其案例应用。本章建立了同时筛选血液中45种常见有毒生物碱的LLE-LC-MS/MS分析方法,并进行了方法学验证。本方法以SKF525A为内标,一次进样分析仅需12 min。目标物及内标SKF525A分离均良好,且45种目标生物碱在相应的线性范围内均有良好的线性,相关系数﹥0.9950,最低检出限为0.05-25 ng/m L,方法的准确度在85.90%-114.95%,日内精密度与日间精密度的相对标准偏差均小于15%。所建方法灵敏度高、选择性好、简便高效,可用于法医毒物分析和临床药物监测中常见未知生物碱中毒的筛选与确证,为相关中毒案件提供科学的技术手段。第四章总结了本论文的研究成果及创新点,并提出进一步的研究方向,为深入探讨雷公藤等常见有毒植物成分的中毒、筛选、鉴定与评价提供研究基础。1、本论文首次创建了多种生物检材中痕量雷公藤甲素及雷公藤酯甲的LC-MS/MS同时检测方法,该方法简便、快速,适用于雷公藤中毒的法医学鉴定和临床诊治。且全面、系统地研究了毒性剂量下的雷公藤甲素在大鼠体内的毒代动力学过程。2、建立了复杂生物检材中欧夹竹桃苷的LC-MS/MS法,并进行了全面的方法学验证。该方法简便,快捷,灵敏度高,并成功应用于一例夹竹桃中毒死亡案件的鉴定,首次分析了人体各组织中的欧夹竹桃苷浓度分布特点,且在多种检材中均检出欧夹竹桃苷的代谢物欧夹竹桃苷元,为夹竹桃中毒的鉴定实践提供了更多指导信息。3、建立了同时筛选血液中45种常见有毒生物碱的LC-MS/MS法,所建方法简便、灵敏、快速、可靠,能满足常见未知有毒生物碱中毒后血液中多种生物碱的同时筛选和确证分析,且成功应用于多起疑似生物碱中毒的案例,为常见未知生物碱中毒后的法医学鉴定、临床诊断及救治提供了更全面的技术保障。本论文成果部分填补了法医毒物学领域中雷公藤、夹竹桃和常见有毒生物碱中毒鉴定及评判的空白,可应用于相关中毒案例的司法鉴定实践中,为法医学鉴定、临床诊治提供科学的依据。