河蚌多糖提取纯化及抗氧化活性研究

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本文是吉林省现代农业重点科技攻关项目—河蚌制品加工关键技术研究及产品综合开发(20150204034NY)和长春市现代农业发展科技支撑计划项目—河蚌制品加工关键技术研究及资源综合开发利用(13NK13)研究内容的一部分。河蚌是一种常见的贝壳类水生动物,其主要功能物质是河蚌多糖。研究表明,河蚌多糖具有清热凉血、抗凝降脂、抗衰老、抑制肿瘤细胞的生长、增强巨噬细胞的吞噬能力和提高机体免疫调节能力等功效。吉林省松花江流域野生河蚌资源丰富,年产河蚌3000-4000吨,价格为打捞成本0.5-0.6元/斤,然而河蚌未得到充分利用,除少部分用作饲料外,多数作为废弃物丢弃,造成环境污染和资源浪费。利用育珠后的河蚌副产物开发具有高附加值的河蚌产品,对提高养蚌的经济效益和减少环境污染有重要意义。本文以野生河蚌副产物—蚌泪和内脏组织为原料,利用PEF辅助蛋白酶解提取多糖、Sevage法脱除游离蛋白、DEAE.纤维素层析和葡聚糖G-100凝胶层析对粗多糖分离纯化,并对多糖的抗氧化活性进行系统研究,为多糖的高效提取和河蚌副产物的综合开发利用提供理论依据。本文主要研究内容和结论如下:1.采用木瓜蛋白酶水解和PEF辅助酶解对河蚌中多糖有效提取,分别研究pH、水料比、酶解时间、酶解温度、电场强度、脉冲数等因素对河蚌多糖得率的影响规律。结果表明,PEF辅助酶解提取河蚌多糖得率高,耗时短。2.PEF辅助酶解提取河蚌多糖得率(Y)与电场强度(X1)、脉冲数(X2)和酶解时间关系的二次回归方程:Y=-30.2578+1.67015X1+1.062125X2+6.667X3-0.00775X1X2-0.038X1X3-0.12X2X3-0.02479X12-0.03369X22-1.309X32响应面优化得出,多糖提取最佳工艺参数为电场强度30.96kv/cm、脉冲数9.22个、酶解时间1.67h,对应河蚌多糖得率为6.08%;各因素对河蚌多糖得率影响的显著性顺序为:电场强度>酶解时间>脉冲数。3.采用Sevage法脱除游离蛋白,得到脱蛋白粗多糖;选用DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶G-100对脱蛋白粗多糖分离纯化;利用截留分子量分别为3500Da、8000-14000Da的透析袋透析去除小分子杂质,得到纯多糖组分AWPS-1和AWPS-2,其得率分别为5.42%和1.96%。4.河蚌多糖感官特性及溶解性分析:河蚌纯多糖为无色固体,空气中久置易氧化,氧化物呈淡黄色,略有土腥味,热水可溶,冷水难溶,不溶于多种有机溶剂。5.河蚌多糖的化学性质研究:粗多糖、纯多糖组分AWPS-1和AWPS-2中总糖含量分别为73.54%、97.79%、95.33%;粗多糖中蛋白质含量为2.24%;纯多糖组分AWPS-1和AWPS-2不含还原糖残基、游离氨基酸和蛋白质。6.河蚌粗多糖、纯多糖组分AWPS-1和AWPS-2均具有超氧阴离子自由基清除能力、过氧化氢清除能力、羟基自由基清除能力、还原能力和DPPH-清除能力,且抗氧化能力随着多糖浓度的增大而增强,并与多糖浓度呈正相关。创新点:首次采用高压脉冲电场辅助蛋白酶水解提取河蚌副产物—蚌泪和内脏组织中多糖,其得率高、耗时短,变废为宝,提高产品附加值,为河蚌多糖的高效提取提供一种新方法,为河蚌资源综合利用开辟一条新途径。
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