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背景:胰腺癌是恶性度最高的肿瘤之一,早期诊断率低,手术切除率低,且胰腺癌发病率及病死率逐年升高。尽管医学诊疗技术的不断进步,胰腺癌患者的五年生存率却没有明显改善。全基因组和转录组研究数据显示,只有1-2%的基因组可编码蛋白,而大部分基因组中的基因编码非编码RNA。长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度大于200个核苷酸的不编码蛋白的RNA分子总称,是以RNA的形式参与多种层面调控基因表达。异常表达及突变的lncRNA与人类很多疾病有密切联系。研究发现在多种人类肿瘤中异常表达的lncRNA,尽管一部分lncRNA表达差异可能是肿瘤继发结果,但大多数lncRNA在细胞转化中发挥促癌或者抑癌基因的重要作用。m6A(N6-methyladenosine,6-甲基腺嘌呤)甲基化修饰作为RNA新一层次的调控,m6A甲基化修饰在RNA转录后调控发挥重要的作用,特别是m6A甲基化修饰引起lncRNA结构稳定性及表达水平发生改变在其中起重要的作用。这提示我们胰腺癌的lncRNA可能存在m6A甲基化修饰并参与调控胰腺癌的迁移侵袭。目的:研究m6A甲基化修饰长链非编码RNA-KCNK15-AS调控EPAB对胰腺癌增殖迁移侵袭的影响,并探讨其中涉及的分子机制。方法:首先从收集3对胰腺癌组织及癌旁组织进行lncRNA微阵列分析,从中挑选表达显著差异的lncRNA-KCNK15-AS(KCNK15-AS)作为研究对象。随后验证KCNK15-AS在胰腺癌组织及胰腺癌细胞中的表达情况,并做临床相关性分析。构建过表达的KCNK15-AS的胰腺癌细胞系,进行增殖迁移侵袭实验,检测KCNK15-AS对胰腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。随后紫外交联RIP实验鉴定KCNK15-AS是否在胰腺癌细胞中发生m6A甲基化修饰。构建过表达及敲低胰腺癌细胞中去甲基化转移酶ALKBH5,紫外交联RIP结合RT-qPCR检测KCNK15-AS的表达情况及其m6A甲基化修饰程度,并观察细胞增殖和迁移侵袭能力。RT-qPCR实验检测KCNK15-AS临近基因的表达变化情况,并选定EPAB为靶基因。Western Blot检测胰腺癌细胞中EPAB的表达情况。构建过表达EPAB的胰腺癌细胞系,进行增殖和迁移侵袭实验。同时在稳定过表达KCNK15-AS的胰腺癌细胞上敲低EPAB,进行增殖和迁移侵袭实验,观察EPAB对胰腺癌细胞的功能影响。双荧光素酶报告基因实验,验证KCNK15-AS对EPAB的启动子活性的影响。结果:KCNK15-AS在胰腺癌组织及胰腺癌细胞验证低表达,且与胰腺癌淋巴结的转移有相关性。过表达KCNK15-AS可抑制胰腺癌细胞的增殖迁移侵袭,发现KCNK15-AS在胰腺癌细胞发生m6A甲基化修饰,且修饰程度比正常胰腺导管上皮细胞高。过表达ALKBH5的胰腺癌细胞在迁移侵袭中发挥抑癌功能。RT-qPCR结果显示过表达ALKBH5后KCNK15-AS表达上调,且KCNK15-AS甲基化修饰程度降低。在胰腺癌细胞上敲低ALKBH5得出相反的结果。RT-qPCR实验验证周围基因的变化,发现EPAB变化最大,选定EAPB为靶基因。RT-qPCR及Westem blot实验发现EPAB是低表达的,且EPAB过表达的胰腺癌细胞表现减弱的增殖和迁移侵袭能力。在过表达KCNK15-AS的胰腺癌细胞上敲低EPAB,增殖和迁移侵袭实验得出相反的结果。最后双荧光素酶报告基因实验发现,KCNK15-AS可激活EPAB的启动子,促进EPAB的转录。结论:在胰腺癌细胞中,m6A甲基化修饰调控KCNK15-AS的表达,肿瘤细胞调控EPAB,抑制胰腺癌增殖迁移侵袭。