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本文研究目的：本实验室克隆了1rrp57基因；并成功地在大肠杆菌中表达了LRRP57融合蛋白，制备了LRRP57的兔抗血清。用免疫共沉淀方法分离检测与LRRP57抗体结合的蛋白发现，它不仅可与LRRP57共沉淀，而且可与一个分子量为105KD的蛋白共沉淀。研究了与LRRP57抗体共沉淀的上述105KD蛋白的结构和在肝再生中的作用。
研究方法：用免疫共沉淀与双向电泳技术相结合，对目的蛋白进行分离纯化；用LC/MS/MS和MALDI-TOF鉴定纯化的目的蛋白的氨基酸序列；用免疫印迹方法和基因表达谱芯片分析目的蛋白及其mRNA在大鼠数种组织器官和在再生肝中的表达动态；用生物信息学方法预测基因的全长核苷酸序列；用DNAman软件分析了11个物种gp96蛋白的同源性。
研究结果：gp96存在于大鼠的睾丸、大脑、肺、食道、心脏等器官，在睾丸中含量最丰富；从大鼠睾丸中分离纯化了目的蛋白，并测序鉴定此蛋白是肿瘤拒绝抗原gp96(Tumorrejectionantigengp96)，为葡萄糖调节蛋白Grp94(glucoseregulatedprotein94)的同物异名；gp96的等电点为5.47，表观分子量为105KD；生物信息学分析表明，gp96基因位于染色体的7q13处，有18个外显子，19个内含子；其基因全长含2904个碱基，起始密码子ATG位于178-180核苷酸处，终止密码子TAA位于2590-2592核苷酸处；基因表达谱芯片分析表明，gp96的mRNA含量在PH后1h再生肝中开始上升，2h达到第一次高峰；之后，6h下降，8h又达到高峰；24h下降，36h出现第三次含量高峰；54h又下降，66h出现第四次含量高峰；144h出现第五次含量高峰。免疫印迹分析表明，gp96蛋白在PH后2h的再生肝中含量稍有下降，8h含量开始增加，18h出现第一个含量高峰；24h有所下降，30h又上升，到48h出现第二次含量高峰；72h含量又急剧下降。用DNAman软件分析11个物种gp96的氨基酸序列表明，gp96是非常保守的蛋白，哺乳动物gp96的同源性高达97％。其氨基酸序列差异主要集中在291-306和763-799两个富含酸性氨基酸的区域。
研究结论：肿瘤拒绝抗原gp96在睾丸和再生肝中含量较高；gp96在肝再生的DNA合成期高表达，可能与肝再生的细胞增殖有关；gp96为糖应激诱导蛋白，它在部分肝切除后高表达，可能有助于提高肝细胞的糖耐受性和抗损伤能力。