【摘 要】
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rhEPO-CHO工程细胞灌注培养获得的细胞收获液,经用Q-SepharoseXL离子交换层析,C反相疏水层析和Superdex75分子筛层析纯化获得EPO,所纯化的EPO纯度达99﹪以上,整个纯化过程中活
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rhEPO-CHO工程细胞灌注培养获得的细胞收获液,经用Q-SepharoseXL离子交换层析,C<,4>反相疏水层析和Superdex75分子筛层析纯化获得EPO,所纯化的EPO纯度达99﹪以上,整个纯化过程中活性回收率为17﹪.经SDS-PAGE,HPLC等方法检测表现为单一峰或单一蛋白条带.SDS-PAGE和HPLC方法测得其分子量为32-28KD.用IEF方法测得pI为3.75-4.15.网织红细胞计数法测得体内比活为9.3-9.5×10<5>IU,用ELISA测得体外活性为12-14×10<5>IU.唾液酸含量为6.5moL/moLEPO.免疫印迹证明其具有天然EPO的免疫原性,N-端15个AA序列分析与文献报道一致.对氨基酸组成及其他一些理化特性也进行了分析.该纯化工艺路线简单,时程短,适合于大规模生产重组人红细胞生成素.
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