目的:研究色胺酮对MAPK信号通路、EMT细胞侵袭和转移、小鼠体内炎性肿瘤微环境乳腺癌的影响,应用非标定量蛋白质组学技术宏观探讨色胺酮抗乳腺癌的作用机制。方法:体外实验:采用不同浓度色胺酮和ERK、p38MAPK和JNK通路抑制剂处理MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖活性。细胞平板克隆形成实验检测色胺酮对MCF-7克隆形成能力的影响。H&E染色观察细胞形态变化。TGF-β1诱导MCF-7细胞发生上皮间质转化(EMT),细胞划痕和Transwell小室实验评价色胺酮对发生EMT后的细胞迁移和侵袭能力的影响。Western-Blot考察ERK、p-ERK、p38、p-p38、JNK和p-JNK蛋白表达水平,以及EMT相关标志蛋白E-cadherin、Snail和MMP-2的表达。体内实验:建立4T1小鼠乳腺癌模型,酶联免疫吸附法(ELISA)测定色胺酮对小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α表达水平的影响。H&E染色评价小鼠肿瘤组织和器官的病理学变化,免疫组化法检测小鼠肿瘤组织中NOS1和COX-2蛋白的表达,Western-Blot法检测小鼠肿瘤组织中NF-κB和STAT3蛋白的表达。蛋白质组学实验研究:采用Nano-Flow UPLC/tims TOF检测色胺酮抗小鼠乳腺癌的表达蛋白,进行色胺酮抗乳腺癌的蛋白质组学研究。结果:色胺酮显著抑制MCF-7细胞增殖活力且呈时间浓度依赖性,色胺酮联合ERK抑制剂组、p38 MAPK抑制剂组、JNK抑制剂组细胞增殖活力与单用色胺酮组比较差异具有统计学意义。细胞平板克隆形成实验发现色胺酮可显著抑制MCF-7细胞克隆的形成。H&E染色下,色胺酮给药组细胞形态有明显的差异。细胞划痕实验和Transwell小室实验表明色胺酮可显著抑制发生EMT后的细胞迁移和侵袭。Western-Blot实验表明经色胺酮处理后的MCF-7细胞,p-ERK和p-JNK表达明显增加,p-p38 MAPK、ERK、p38 MAPK和JNK表达均未发现明显变化;E-cadherin蛋白在TFG-β1模型组中表达减少,色胺酮组中表达上调,Snail和MMP-2蛋白在TFG-β1模型组中表达增加,色胺酮组中表达明显下调。不同剂量色胺酮组对小鼠肿瘤生长有一定抑制作用,但对小鼠体重和脾脏指数均未有明显影响。ELISA结果显示色胺酮给药组血清中IL-6和IL-12表达水平无显著性差异,IL-10、IL-2和TNF-α的表达水平明显升高。H&E染色显示,0.5%CMC-Na组细胞异型性较多,存在病理性核分裂,核浆比例失调,呈现较多的空泡化,凋亡细胞较少。低、中、高剂量色胺酮组细胞异型性和病理性核分裂都减少,部分细胞出现核固缩,有凋亡细胞存在。免疫组化实验结果表明色胺酮组肿瘤组织中COX-2、NOS1蛋白表达显著降低。WesternBlot检测色胺酮组中STAT3蛋白表达无显著变化,NF-κB蛋白表达显著降低。蛋白质组学研究共鉴定出3997个蛋白质,有2911个蛋白可定量,模型组与色胺酮组共750个差异表达蛋白,其中286个蛋白上调,464个蛋白下调。通过GO分析表明,这些差异表达蛋白主要参与增殖、细胞迁移、凋亡、免疫、血管生成、和炎症调节等生物学过程。KEGG通路分析进一步表明,差异表达蛋白主要集中于T细胞受体、B细胞受体、Toll样受体、NF-κB、Ras、IL-17、TNF、PI3K-Akt和MAPK等多条信号通路,存在与肿瘤的增殖、凋亡、炎症调节及预后密切相关的差异蛋白。结论:色胺酮可抑制MCF-7细胞的增殖活力,其作用机制可能与ERK、JNK信号通路激活有关,可显著抑制由TGF-β1诱导的乳腺癌MCF-7细胞发生EMT后的迁移和侵袭,通过调控EMT标志物影响EMT效应。色胺酮对乳腺癌的体内生长有一定的抑制作用,能够调节肿瘤微环境相关炎性因子的表达水平变化。非定量蛋白质组学技术有效筛选出色胺酮作用于乳腺癌小鼠后的差异表达蛋白,发现与色胺酮抗乳腺癌小鼠作用可能密切相关蛋白。