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犬流感是由犬流感病毒(Canine Influenza Virus，CIV)引起犬以食欲减退、体温升高、流鼻液、咳嗽和呼吸困难为主要特征的疾病。而犬作为伴侣动物与人的关系密切，同时犬流感病毒可以跨种传播等特征在流感病毒病原学、生态学及流行病学中占有举足轻重的作用。但CIV常用的两种检测方法费时费力，因此建立CIV快速检测技术，对于犬流感的监测、早期诊断及其防控等具有重要的公共卫生学意义。 本论文如下： 根据Genbank已发表的犬流感病毒(CIV)相对保守的M片段设计合成1对含有酶切位点的特异性RT-PCR鉴定引物(上游引物CIV-F和下游引物CIV-R)，以标准犬流感病毒为模板，用RT-PCR的方法扩增出长度为1044bp特异性片断，将其克隆到载体pET-32a(+)载体上，重组质粒经PCR鉴定为阳性，然后将含有目的片段的重组质粒进行线性化，通过体外转录试剂盒将M片段进行体外转录、RNA定量。利用PrimerExplorer V4 LAMP专业设计软件(http：//primer explorer.jp/e/index.htmL)，设计两对特异性引物F3/B3，FIP/BIP，以及一对环引物LoopF/LoopB，建立CIV的新型可视化的RT-LAMP检测方法，重点对反应体系中的引物浓度、MgSO4、锰离子(Mn2+)与钙黄绿素(Calcein)的比例等分别进行优化，并进行敏感性和特异性试验。检测结果可通过琼脂糖凝胶电泳、颜色变化来判定。结果表明：所建立的反应体系在恒温水浴锅中63.5℃、60min即可得到其特有的阶梯状条带，出现明显的可视化的颜色变化。对犬细小病毒和犬瘟热病毒的扩增结果均为阴性。该方法对CIV的最小检测限为10copies/μL RNA，灵敏性高于普通RT-PCR方法10倍，对69份CIV疑似阳性临床样品检测，结果表明：RT-LAMP和RT-PCR方法的检测结果的符合率为100％，所建立的可视化的RT-LAMP方法切实可用。该方法为犬流感病毒的临床检测提供了一种简便、实用的方法，特别是在发展中国家更加实用。 本研究还表明：铜离子可以淬灭RT-LAMP体系中钙黄绿素的荧光但是反应后不能解离。因此铜离子不能代替可视化RT-LAMP反应体系中的锰离子。