【摘 要】
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蛋白质芯片是蛋白质相关研究中最有前景的一项技术,抗体芯片就是这项技术的分支。抗体芯片可以检测某一特定的生理或病理过程中相关蛋白的表达模式,具有快速、高效、操作简单
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蛋白质芯片是蛋白质相关研究中最有前景的一项技术,抗体芯片就是这项技术的分支。抗体芯片可以检测某一特定的生理或病理过程中相关蛋白的表达模式,具有快速、高效、操作简单、结果准确、灵敏度高等特点,在生物学研究中有着巨大的潜力。
最近研究表明,hCES可作为肝癌的新标志物。我们前期研究工作表明,肝脏恶性肿瘤患者血清中hCES2含量减少,而结肠癌及其它肿瘤患者血清中hCES2含量基本无改变,hCES2对肝癌等的研究具有重要意义。
目前国内外尚未有CES2抗体芯片制备的报道,于是本文制作了GST标记的CES2抗体芯片,并检测了它的有效期。
首先,用大肠杆菌诱导表达GST-CES2抗原,杂交瘤细胞接种小鼠制备GST-CES2单抗作为捕获抗体,FITC标记GST-CES1多抗作为检测抗体。将捕获抗体植于修饰过的硅片表面制得抗体芯片,然后加入GST-CES2融合蛋白,再加入FITC标记的GST-CES1检测抗体,最后用倒置荧光显微镜检测FITC发出的荧光信号,每周检测一次。
大肠杆菌重组表达的GST-CES2蛋白纯度>70%;杂交瘤接种的方法获得的GST-CES2单抗,工作稀释倍数为1:400;于硅芯片上检测到荧光,于第5周时荧光便非常微弱,第6周荧光消失。
1)成功制备GST-CES2硅抗体芯片。所获结果较好,为本实验组进一步的研究奠定材料和方法的基础,也为肝癌的研究提供了一个有效制剂;2)APETES(水)修饰的硅芯片与GST-CES2单抗的结合时效为5周。
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