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目的：本研究旨在分离人脐带血来源的CD34~+干细胞并在体外分化扩增为成熟的功能性树突状细胞(dendritic cell，DC)的过程，并以HPV16E6／18E7基因转染DC制备DC疫苗，检测其生物学特性；观察并测定其在体外诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity T lymphocyte，CTL)活性，同时观察其对经免疫重建的SCID小鼠体内食管癌生长的免疫防治效应。方法：1．应用质粒提取试剂盒提取pcDNA3.1-HPV16E6／18E7质粒，分光光度计检测其浓度和纯度，然后通过阳离子脂质体DMRIE-C将质粒DNA转入经rhGM-CSF、rhTNF-α体外联合诱导12天的人脐血来源CD34~+干细胞，制备负载HPVl6E6／18E7基因的DC疫苗，倒置显微镜下观察并以流式细胞仪检测转染前、后其表面分子CD80、CD86、CD83及转染后E6／E7蛋白的表达情况。2．斑点杂交法测定食管癌细胞EC-109的HPV类型。3．体外抗肿瘤实验采用MTT法，检测HPV18E7-DC疫苗诱导的人外周血CTL对食管癌细胞EC-109的杀伤活性。4．HPV16E6／18E7-DC疫苗小鼠腹腔内注射2次，间隔3d，70d后检测疫苗是否具有致瘤性。5．按随机数字法将SCID小鼠随机分为免疫保护组和免疫治疗组。免疫保护组随机分成C、Im-T、Im-16D和Im-18D四小组，分别用PBS、T细胞、HPV16E6-DC+T细胞、HPV18E7-DC+T细胞免疫接种后，再接种EC-109细胞；免疫治疗组分成C、Tr-T、Tr-16D和Tr-18D四小组，分别以PBS、T细胞、HPV16E6-DC+T细胞和HPV18E7-DC+T细胞对EC-109荷瘤小鼠进行免疫治疗。以诱发小鼠肿瘤的潜伏期和肿瘤的体积、重量、生长速度等为观察指标，并进行统计学分析，以探讨HPV16E6／18E7-DC疫苗对食管癌细胞株EC-109体内生长的免疫保护和免疫治疗效应。结果：1.50ml脐带血可分离出CD34~+干细胞约1.0×10~6，台盼蓝染色95％以上不显色；在rhGM-CSF和rhTNF-α联合诱导下，14天后CD34~+干细胞约扩增10-20倍，DC的纯度达90％以上。CD34~+干细胞在培养过程中逐渐形成细胞集落，集落逐目增多增大，并在第8-9天达到最大，此后集落逐渐减少变小，并脱落成具有典型树枝状突起的成熟DC。表面分子CD80、CD86、CD83表达阳性率分别为65.5％、65.9％和80.7％。HPV16E6／18E7基因转染后DC生长良好，流式细胞仪检测发现表面分子CDSO、CD86、CD83表达阳性率分别为81.6％、80.5％和86.6％，目的基因蛋白E6、E7表达率分别为38.6％和47.5％。2．斑点杂交法检测发现食管癌细胞EC-109的病毒类型为HPV18型。3．HPV18E7-DC疫苗致敏的外周血CTL对食管癌细胞EC-109的杀伤活性明显高于DC组致敏的CTL及T组和C组(P＜0.01)，且随效靶比的增高而增强(P＜0.05)。DC致敏的CTL的杀伤活性与T组比较也有显著性差异(P＜0.05)。4．致瘤性研究显示腹腔注射HPV16E6／18E7-DC疫苗的小鼠均未发生肿瘤。5．在免疫保护组，Im-16D和Im-18D组肿瘤的生长速度减慢，肿瘤潜伏期较C组和Im-T组明显延长(P＜0.01)，肿瘤体积和肿瘤重量均明显小于C组和Im-T组(P＜0.01)，Im-16D和Im-18D组比较差异无统计学意义(P＞0.05)；在免疫治疗组，Tr-16D和Tr-18D肿瘤体积和肿瘤重量均明显小于C组和Tr-T组(P＜0.01)，Tr-16D和Tr-18D比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：1．以免疫磁珠法从人脐带血中分离CD34~+干细胞，在体外经rhGM-CSF和rhTNF-α联合诱导14天，可分化扩增出大量高纯度、形态功能成熟的DC，此方法操作简便，分离细胞量大、纯度高，具有巨大的实用价值。2．使用阳离子脂质体将HPV-E6E7基因转入DC，细胞生长良好，并且目的基因在DC内高表达，说明DC疫苗构建成功，阳离子脂质体可以安全、有效的介导基因转入DC，为DC疫苗的构建做了有益探索。3．HPV18ET-DC疫苗在体外能诱导出高效的特异性CTL，对表达HPV18的食管癌EC-109细胞产生强大的特异性杀伤效应。4．HPVl6E6／18E7-DC疫苗无体内致瘤性，安全可靠。5．HPV16E6／18ET-DC疫苗能显著抵抗EC-109细胞对小鼠的攻击，并能显著抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长，具有高效而显著的免疫保护和免疫治疗效应。