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目的本研究通过建立烹调油烟细颗粒物(CookingOilFumederivedPM_(2.5),COFsPM_(2.5))暴露和维生素D3(VD3)干预细胞模型,探讨维生素D3在COFs-PM_(2.5)暴露对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡损伤中的作用,并进一步探索其潜在的分子机制,为进一步研究维生素D3抑制COFs-PM_(2.5)对脐带血管损伤提供新的证据。方法1.模拟厨房烹调环境,通过PM_(2.5)采样器收集COFs-PM_(2.5),采用增重法计算COFs-PM_(2.5)的质量,最终配置成100mg/mL的原液;2.将收集好的含COFs-PM_(2.5)的滤膜放置于烧瓶中,加入适量的无水乙醇,放超声震荡仪中震荡12h后送至透射电镜下观察;3.将HUVECs接种于96孔板,用不同浓度的COFs-PM_(2.5)(0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL)和VD3(0nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L)处理12h、24h、36h后,用MTT检测COFs-PM_(2.5)以及VD3对HUVECs存活率的影响,最终确定COFsPM_(2.5)以及VD3的染毒浓度和时间;4.将HUVECs暴露于含0(1‰DMSO 1‰absoluteethylalcohol)、100μg/mLCOFs-PM_(2.5)、100μg/mLCOFs-PM_(2.5) 1000nmol/LVD3和1000nmol/LVD3的细胞培养液中培养24h,通过westernblot方法检测p53/Bax/caspase通路相关蛋白的表达;通过RT-PCR检测p53/Bax/caspase通路相关mRNA的表达水平;5.将HUVECs暴露于含0、100μg/mLCOFs-PM_(2.5)、100μg/mLCOFs-PM_(2.5) 1000nmol/LVD3和1000nmol/LVD3的细胞培养液中培养24h后,通过流式细胞仪检测不同处理组对HUVECs凋亡水平的影响。结果1.对收集的COFs-PM_(2.5)通过透射电镜观察发现,烹调油烟PM_(2.5)粒径为200nm-2.5μm不等的颗粒物,并且绝大多数的形状不规则。2.MTT结果表明,随着COFs-PM_(2.5)浓度和时间的增加,HUVECs的存活率逐渐降低,并存在一定的剂量反应趋势;而VD3与COFs-PM_(2.5)共孵育后,HUVECs的存活率明显上升,并随着VD3浓度的增加,细胞存活率也明显增加。3.与对照组相比,COFs-PM_(2.5)的暴露可使HUVECs内p53、Bax的蛋白表达水平升高,而bcl-2的表达水平降低,补充VD3后,这种现象得到明显改善;RT-PCR结果显示p53、Bax、bcl-2mRNA的表达水平与蛋白趋势一致。4.与对照组相比,COFs-PM_(2.5)暴露组细胞内caspase-3、7、9蛋白的表达水平明显降低,而cleaved-caspase-3、7、9蛋白表达水平明显上升,但cleaved-caspase-3、7、9与caspase-3、7、9的比值上升,当与VD3共孵育后,这种现象可以得到明显改善;此外RT-PCR结果显示,与对照组相比,暴露组caspase-3、7、9mRNA的表达水平均明显上升,而与VD3共孵育后,其表达水平明显降低。5.COFs-PM_(2.5)的暴露可明显促进HUVECs的细胞凋亡率,但补充VD3后,HUVECs的凋亡率明显降低。结论本研究证明了COFs-PM_(2.5)可明显促进HUVECs的凋亡,而VD3可抑制COFsPM_(2.5)对细胞凋亡的影响,并阐述了其潜在的分子学机制,揭示了p53/Bax/caspase信号路在VD3抑制COFs-PM_(2.5)诱导的细胞凋亡中的作用,为研究VD3抑制COFsPM_(2.5)对脐带血管损伤提供新的证据,也进一步拓展了VD3的临床应用。