论文部分内容阅读
目的1.探究长链非编码RNA LINC00052在CRC发生发展中的作用。2.明确LINC00052在CRC中发挥作用的机制。方法1.使用qRT-PCR技术检测LINC00052在收集的24对结直肠癌组织及癌旁组织标本中的表达情况。2.构建LINC00052过表达质粒并合成其干扰片段,进行克隆形成实验、MTS实验、transwell小室实验和划痕实验,检测LINC00052在结直肠癌细胞HT-29和SW620中的生物学功能。3.使用生物信息学软件预测与LINC00052相互作用的microRNA。进行双荧光素酶报告基因测定以验证两者之间的相互作用关系。4.运用qRT-PCR检测microRNA在CRC组织中的表达情况,利用microRNA模拟物和抑制剂进行细胞生物学实验,检测microRNA的生物学功能。5.使用生物信息学网站预测microRNA相互作用的下游靶基因,双荧光素酶实验检测microRNA与靶基因的关系。6.QRT-PCR、WB检测靶基因在结直肠癌组织标本中的表达情况,transwell和划痕实验检测microRNA以及LINC00052共转对结直肠癌细胞迁移侵袭的影响。7.构建LINC00052过表达裸鼠转移模型,检测LINC00052在体内对结直肠癌细胞转移的影响。结果1.LINC00052在结直肠癌组织中表达下调,并且能够抑制结直肠癌细胞的增殖和转移。2.LINC00052能够下调miR-574-5p表达,且miR-574-5p在结直肠癌组织中表达上调,能过促进结直肠癌细胞的增殖和转移。3.LINC00052能够结合miR-574-5p上调CALCOCO1表达,从而抑制结直肠癌细胞的转移。4.CALCOCO1在结直肠癌组织中下调,miR-574-5p能够恢复LINC00052对结直肠癌细胞转移的抑制作用。5.在动物实验中过表达LINC00052能够抑制结直肠癌细胞在体内的转移。结论LINC00052通过竞争性的结合miR-574-5p上调CALCOCO1表达来抑制结直肠癌转移。