可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen, ENA)是真核细胞的一类小核RNA与蛋白质复合物,主要包括RNP、Sm、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70等,其抗体称之为抗ENA抗体,ENA多肽抗体是多种自身免疫性疾病的免疫学标志：抗U1-RNP抗体是混合性结缔组织病(MCTD)的标志性抗体,抗SSB抗体是干燥综合症(SS)和系统性红斑狼疮(SLE)等的标志性抗体。自身抗体对自身免疫性疾病的诊断具有重要的指导作用。目前,医院检测抗ENA多肽抗体的方法主要是酶联免疫吸附实验(ELISA),而实现这一目的需要制备高纯抗原。所以本实验的目的在于,应用基因工程方法获得性质单一、且具有免疫特异性的重组蛋白。本实验以人脑cDNA文库为模板,通过PCR获得U1RNP-70多肽的DNA片段,并定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白)融合系统的载体pMALTM-c和pMALTM-c-2X中。阳性重组子经双酶切、PCR鉴定以及DNA序列测定获得了验证。SDS-PAGE显示,U1RNP-70融合蛋白得到高表达。通过亲和层析纯化后,Western—blotting和ELISA检测证明,该融合表达蛋白具有U1RNP-70的免疫原性和免疫特异性。用FactorXa切割MBP-U1RNP-70得到单一的U1RNP-70抗原蛋白,再次经ELISA法检测,结果显示融合蛋白与非融合蛋白的抗原敏感性和特异性无明显差异,表明标签MBP对于融和蛋白的抗原性影响不大。另外在本实验室前期工作的基础上,高效表达、纯化了可溶性融合蛋白SSA、SSB。SDS-PAGE证明SSA,SSB融合蛋白得到高表达。纯化后经Western—blotting和ELISA实验证明,表达蛋白分别具有SSA, SSB免疫原性和免疫特异性,其中SSB的免疫学特异性和敏感性与天然的生化制品相当。