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[目的]本研究通过检测miR-199b-5p在乳腺癌患者组织(包括癌、癌旁及正常组织)及血浆外泌体中的表达情况,探讨其临床意义及相关性;同时,我们选用三阴性乳腺癌细胞株HCC1937(ER、PR及HER-2均阴性)及MCF-7 (激素ER阳性、PR及HER-2阴性)作为实验对象,通过mimic在这两株细胞中过表达miR-199b-5p,观察 miR-199b-5p 对乳腺癌 HCC1937、MCF-7 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响;最后,探讨miR-199b-5p与DDR1的相互关系,为临床治疗乳腺癌提供新的标志和潜在重要靶点奠定基础。[方法]1、以miR-199b-5p为作用靶点合成miRNAmimic并用脂质体法转染HCC1937、MCF-7细胞,同时设NC作为阴性对照组。2、通过荧光及qRT-PCR筛选稳定细胞转染株。3、用细胞划痕的方法检测过表达miR-199b-5p对乳腺癌细胞HCC1937、MCF-7迁移能力的影响。4、用Transwell小室检测过表达miR-199b-5p对HCC1937、MCF-7细胞迁移及侵袭能力的影响。5、用CCK8法检测过表达miR-199b-5p对HCC1937、MCF-7细胞增殖能力的影响。6、用流式细胞术分析过表达miR-199b-5p对HCC1937、MCF-7细胞凋亡率的影响。7、用 western blotting 检测过表达 miR-199b-5p 后对 HCC1937、MCF-7 细胞中DDR1蛋白表达的影响。8、用试剂盒提取组织及外周血外泌体中的miRNA,并用qRT-PCR方法检测miR-199b-5p在乳腺癌组织中及外周血外泌体中的表达情况。[结果]1、 qRT-PCR 检测显示 miR-199b-5p mimic 能明显提高 HCC1937、MCF-7乳腺癌细胞株中miR-199b-5p表达水平(p<0.05);2、 CCK8 检测显示 miR-199b-5pmimic 转染 HCC1937、MCF-7 细胞后细胞增殖受到显著抑制(p<0.05);3、 细胞划痕实验显示经miR-199b-5p mimic转染HCC1937细胞后迁移速度明显减慢(p <0.05);4、 流式细胞术检测结果显示miR-199b-5p mimic转染HCC1937、MCF-7细胞后凋亡率显著增加(p <0.05);5、 通过qRT-PCR检测乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及正常组织发现,相对于正常组织,乳腺癌组织中miR-199b-5p表达显著下调(p <0.05)6、 Western blotting 结果显示:经 miR-199b-5p mimic 转染后,DDR1 蛋白表达均降低(p<0.05)。[结论]1、过表达miR-199b-5p可明显抑制乳腺癌细胞株HCC1937、MCF-7的增殖,减低其迁移速度,促进乳腺癌细胞HCC1937、MCF-7的凋亡。2、在HCC1937、MCF-7乳腺癌细胞株中过表达miR-199b-5p使DDR1表达明显降低。3、相对于正常组织,乳腺癌组织中miR-199b-5p表达显著下调。4、乳腺良恶性肿瘤患者外周血外泌体中miR-199b-5p表达无明显差异。