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[目 的]选取鼻咽癌细胞株CNE-1细胞构建鼻咽癌细胞发生上皮-间质转化的细胞模型,筛选出差异表达的lncRNA,确定鼻咽癌细胞上皮-间质转化发生发展过程中的关键lncRNA,并探索其功能。为探索lncRNA在鼻咽癌侵袭、转移过程用的作用提供理论证据,并为鼻咽癌的诊断及治疗提供新思路。[方 法]1.体外培育鼻咽癌细胞株CNE-1细胞24小时,用5ng/mL的TGF-β1试剂处理实验组细胞24小时,诱导CNE-1细胞发生上皮-间质转化,用光镜观察细胞形态的变化;2.提取细胞RNA和蛋白质,分别通过qPCR和Western Blot验证实验组和对照组中上皮-间质转化的分子标志物E-cadherin,N-cadherin,波形蛋白和Twist蛋白等的表达水平差异;3.加用TGF-β1信号通路抑制剂LY2109761与TGF-β1共处理CNE-1细胞,进一步验证TGF-β1是诱导CNE-1细胞发生EMT的关键因素;4.提取实验组和对照组的RNA,进行测序,进行生物信息分析、GO功能富集分析、KEGG信号通路富集分析、差异基因验证等筛选出差异表达的lncRNA;5.从筛选出的lncRNA中挑选上调最明显的基因lncRNAAL591178.1进行验证,通过细胞转染的手段干扰其表达,通过qPCR和Western Blot验证CNE-1细胞上皮-间质转化分子标志物E-cadherin,N-cadherin,波形蛋白和Twist蛋白等的表达水平的改变;6.将未经TGF-β1处理的CNE-1细胞、仅经过TGF-β1处理的CNE-1细胞、经过TGF-β1处理且转染阴性对照的siRNA的CNE-1细胞和经过TGF-β1处理且转染si-AL的siRNA的CNE-1细胞分别设为四组,分别提取四组细胞的RNA和蛋白,分别进行qPCR和Western Blot验证,比较四组之间的上皮-间质转化分子标志物的表达水平差异。[结 果]1.100倍光镜下可见细胞发生了上皮间质改变,表现为细胞间黏连减少,细胞形态变为纺锤形;2.TGF-β1可以诱导CNE-1细胞EMT分子标志物的表达水平发生改变,E-cadherin表达增高,N-cadherin、Vimentin和Twist表达减低;3.加用LY2109761与TGF-β1共处理CNE-1细胞后,CNE-1细胞的EMT进程被抑制;4.提取实验组和对照组的RNA,进行测序,进行生物信息分析、GO功能富集分析、KEGG信号通路富集分析、差异基因验证等筛选出了差异表达的lncRNA,从中选取了 10个上调的lncRNA和10个下调的lncRNA进行qPCR验证,大部分基因的qPCR验证结果与分析的结果一致;5.细胞转染后,与阴性对照组si-NC组相比,si-AL组的CNE-1细胞的MOYM3的表达水平明显减低,E-cadherin的表达增高,而N-cadherin、波形蛋白和Twist蛋白的表达减低,表示转染的siRNA可以有效抑制lncRNA AL591178.1的表达。同时,表示干扰lncRNAAL591178.1的表达后,CNE-1细胞的EMT进程被逆转;6.营救实验进一步说明了在TGF-β1诱导CNE-1细胞EMT过程中,lncRNAAL591178.1的表达水平上调,E-cadherin表达水平显著降低,而N-cadherin、波形蛋白和Twist表达增加,促进CNE-1细胞发生EMT,抑制lncRNAAL591178.1的表达后,E-cadherin表达水平显著增加,而N-cadherin、波形蛋白和Twist表达减低,EMT进程被逆转。[结 论]TGF-β1可以诱导CNE-1细胞发生EMT,lncRNAAL591178.1是这个过程中潜在的关键LncRNA基因,在CNE-1细胞EMT过程中表达上调,抑制其表达可以有效抑制EMT的发生。