自交不亲和性(Self-incompatibility,SI)是高等植物特有的一种自我识别机制.在配子体自交不亲和的茄科、玄参科和蔷薇科植物中,已知S-RNases控制花柱的自交不亲和性,但还没有找到控制花粉自交不亲和性的基因.在金鱼草和蔷薇科的几个种的S位点都分离到了一类F-box蛋白,其中我们分离到距离S-RNase最近的一个F-box基因AhSLF-S<,2>.为了研究AhSLF-S<,2>的功能,我们通过酵母双杂交和免疫共沉淀的方法证明AhSLF-S<,2>和S-RNase可以相互作用但没有等位基因的特异性;在金鱼草中,通过免疫共沉淀或pull-down实验证明AhSLF-S<,2>可以和Ask1-like和Cul1-like蛋白,推测它们可能形成类似Skp1/Cul或CDC53/F-box(SCF)复合体;通过体内和体外实验发现花粉用26S蛋白小体的抑制剂MG115和MG132处理后,亲和授粉的花粉管生长受到抑制,但是对不亲和授粉的花粉管的生长几乎没有影响,表明ubiquitin/26S蛋白小体可能参与了花粉的亲和反应;通过免疫印记检测发现亲和授粉后的花柱中的蛋白质泛素化水平随时间的延长而增加,而不亲和授粉的花柱中蛋白质泛素化水平变化不大.通过免疫共沉淀实验证明用亲和花柱粗体液培养的花粉中的核酸酶被泛素化,而用不亲和花柱粗体液培养的花粉中的核酸酶不被泛素化或被泛素化的水平低.在亲和授粉的花柱中,核酸酶的表达水平在授粉36小时后明显降低,提示在亲和授粉中,AhSLF-S2可以与S-RNase作用,并且可能通过SCF复合体降解S-RNase.为了进一步研究AhSLF-S<,2>的功能,把含有AhSLF-S<,2>和AhS<,2>-RNase的可转化TAC克隆(TAC26)转化到自交不亲和的矮牵牛(Petunia hybrida)中.通过对T<,0>代进行Southern及RT-PCR和免疫印记检测证明AhSLF-S<,2>和S<,2>-RNase在矮牵牛中分别在花粉中和花柱中正常表达.T<,0>代授粉实验发现AhSLF-S<,2>正确表达的转基因植株的花粉产生自交亲和现象.对T<,1>代植株进行Southern检测证明AhSLF-S<,2>和S<,2>-RNase在转基因矮牵牛中稳定遗传;通过RT-PCR和免疫印记检测证明它们分别在矮牵牛的花粉中和花柱中正常表达;同样进行授粉实验,证明花粉的自交不亲和性被转基因改变并可以遗传,因此推测AhSLF-S<,2>控制了花粉的自交不亲和性.