鸡白痢沙门菌(Salmonella pullorum)是一种常见的禽类病原菌,可引起雏鸡关节炎、腹泻和食欲不振等一些急性系统性疾病,可以通过鸡胚垂直传播,还会通过粪便和饮用水经消化道和呼吸道水平传播。感染鸡白痢沙门菌会导致鸡的生产性能下降,明显降低种蛋孵化率,或引起鸡群的大规模发病和死亡,严重影响畜禽健康,造成重大经济损失。沙门菌是我国农业部要求重点监测的14种动物疫病病原菌之一,所有种畜禽场必须净化。而且在食品安全方面,所有涉及的食品现行标准中,均不得检出沙门菌,这也使沙门菌的净化不仅仅涉及畜禽养殖行业,更关乎食品安全和公共卫生安全。近年来由于抗生素的滥用,鸡白痢沙门菌已经对多种抗生素产生耐药性,日益成为影响家禽养殖业和公共卫生安全的重要病原菌,严重制约养禽业的发展,影响公共卫生安全。噬菌体作为一类能特异性识别裂解病原微生物的一种病毒,可利用其宿主特异性对特定微生物进行检测。尾丝蛋白是噬菌体特异性识别宿主的物质基础,筛选表达出噬菌体的尾丝蛋白在特定微生物检测净化等方面具有重要意义。本实验对噬菌体YSP2进行纯化浓缩后,使用蛋白质多肽分子鉴定技术对其进行全蛋白质谱分析,结果得到52个蛋白氨基酸序列,其中确定了15个氨基酸序列的功能。包括尾丝蛋白、裂解酶、衣壳蛋白等一些噬菌体常见蛋白。参考蛋白氨基酸数据库,通过同源性比对分析,确定功能的蛋白序列中有5段为假定尾丝蛋白氨基酸片段。五段尾丝蛋白氨基酸序列同源性很高,均来自沙门菌噬菌体。比较分析后选择一段长度为1503bp的编码尾丝蛋白的基因序列,将目的片段与载体连接后构建重组质粒,通过PCR鉴定、双酶切验证、序列分析及卡那霉素抗性筛选获得了能够表达尾丝蛋白35Q的阳性菌株。通过大肠埃希菌表达系统,分别对温度、时间及转速等参数进行优化,最终获得重组尾丝蛋白35Q。尾丝蛋白35Q与噬菌体YSP2对靶细菌的竞争性吸附试验,免疫电镜试验证实尾丝蛋白35Q具有较好的吸附活性。提取鸡白痢沙门菌外膜蛋白(OMP)、脂多糖(LPS),通过ELISA实验正向验证尾丝蛋白35Q靶向吸附位点,实验结果显示35Q对鸡白痢沙门菌外膜蛋白(OMP)具有较强的吸附作用,证明尾丝蛋白35Q能够与外膜蛋白结合;破坏鸡白痢沙门菌表面的OMP和LPS,然后分别与噬菌体YSP2进行吸附实验,结果显示,相比PBS处理后的沙门菌,YSP2对破坏OMP沙门菌的吸附率明显下降,而YSP2对破坏LPS沙门菌的吸附率下降不明显,这种结果也从反向证明了鸡白痢沙门菌表面OMP是噬菌体YSP2的结合靶点之一。综上所述,在本研究中,构建并筛选了能够高效表达沙门菌噬菌体尾丝蛋白的大肠埃希菌表达菌株。通过条件优化,诱导表达了重组尾丝蛋白35Q,其体外吸附活性良好。本研究旨在以噬菌体尾丝蛋白作为生物工具,了解其靶向吸附作用,并在此基础上确定其宿主菌表面结合受体,为进一步了解沙门菌噬菌体与宿主的互作机制,靶向药物的开发和微生物检测提供了物质和结构基础。