畜禽源弯曲菌分离株的生物学特性及空肠弯曲菌全菌灭活疫苗的评价研究

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弯曲菌(Campylobacter)是一种微需氧、菌体呈弧形或螺旋形的革兰氏阴性细菌,主要包括空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)和结肠弯曲菌(Campylobacter coli),其中空肠弯曲菌在人弯曲菌感染中占90%以上。空肠弯曲菌感染人主要引起腹泻性肠炎,同时与人自身免疫性疾病如格林-巴利综合征等密切相关;感染家畜主要引起母畜流产、不孕、乳房炎和幼畜腹泻等;感染家禽后不表现任何临床症状,曾被认为是家禽肠道内的一种共生菌,但却成为人感染的主要来源。鉴于家禽空肠弯曲菌感染在食源性致病菌污染中的重要地位,降低家禽空肠弯曲菌带菌量是控制人感染风险的关键措施。本试验首先对畜禽源弯曲菌分离株进行生物学特性鉴定,进而利用空肠弯曲菌参考菌株NCTC-11168制备全菌灭活疫苗,免疫鸡通过口服攻毒试验来评价该疫苗对空肠弯曲菌在鸡肠道内定植的影响,研究结果将为家禽空肠弯曲菌的防控提供参考。首先利用多重PCR方法对本实验室保存的疑似弯曲菌分离株进行鉴定,共鉴定得到弯曲菌112株,其中猪源弯曲菌73株,均为结肠弯曲菌;鸡源弯曲菌33株,均为空肠弯曲菌;另外鉴定得到3株鸭源空肠弯曲菌、2株牛源空肠弯曲菌和1株牛源结肠弯曲菌。药敏试验结果显示,弯曲菌分离株对不同类别的抗生素均存在程度不等的耐药性,主要包括环丙沙星耐药率为92.0%、萘啶酸88.4%、克林霉素74.1%,对碳青霉烯类抗生素亚胺培南最为敏感,耐药率仅为2.6%。弯曲菌分离株运动力大小测定结果显示,共有78株(69.6%)弯曲菌存在运动力,且猪源结肠弯曲菌存在运动力的比例更大。弯曲菌分离株生物膜形成能力强弱测定结果显示,10株弯曲菌具有强生物膜形成能力(8.9%);66株弯曲菌具有中等生物膜形成能力(59.0%)。目前尚无抑制或降低空肠弯曲菌在家禽体内定植的商品化疫苗,本试验利用一种新的灭活剂H2O2与Cu Cl2混合物灭活空肠弯曲菌参考菌株NCTC-11168制备油佐剂灭活疫苗,免疫SPF鸡后测定灭活疫苗诱导产生的特异性抗体水平,通过口服攻毒评价疫苗免疫对空肠弯曲菌在鸡盲肠内定植的影响,同时测定盲肠细胞因子在转录水平的变化,以及对盲肠绒毛长度和隐窝深度的影响。结果显示制备的全菌灭活疫苗免疫SPF鸡后可诱导产生特异性血清Ig G和胆汁Ig A,但口服攻毒后不能抑制或降低空肠弯曲菌在盲肠内的定植水平,且对免疫鸡的盲肠绒毛长度和隐窝深度无显著影响。测定的鸡盲肠中多数细胞因子在空肠弯曲菌攻毒前与攻毒后1 d的转录水平差异不显著,而在攻毒后10 d显著上升;同日龄样品比较结果显示,部分细胞因子的表达量在佐剂对照组和全菌免疫组较空白对照组显著上调。本试验研制的全菌灭活疫苗虽可诱导产生高水平特异性抗体,但不能降低空肠弯曲菌在鸡盲肠内的定植水平,提示空肠弯曲菌在鸡盲肠内的定植机制需深入探究。
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