黄梁木(Neolamarckia cadamba),茜草科团花属树种,是一种具有生长迅速、树干笔直等特点的重要经济速生林木,在医疗、建筑、食品饲料等方面具有广阔的前景。Real-Time PC R是一种定量分析基因转录表达水平较灵敏的技术,但是它的成功取决于选用合适的内参基因。随着黄梁木全基因组测序及功能基因研究的深入,目前还缺乏有效、稳定的黄梁木内参基因来定量功能基因的转录水平。本研究利用转录组数据筛选、扩增并克隆了候选内参基因及Nc SUT4、Nc NCED3的c DNA、g DNA,利用生物学软件分析了15个候选内参基因在66个黄梁木样品中的表达稳定性;分析了Nc SUT4在黄梁木不同组织、不同时间、不同光合周期的转录表达特性。主要研究结果如下所示:1.在黄梁木转录组数据中选择、扩增、克隆15个候选内参基因包括:ACT1、ACT7、ACT11、TUA2、TUA4、TUA5、EF-1-α、GAPDH、RPS25、Rubisco、RPL10A、MDH、F-BOX、SAMDC及Nc SUT4、Nc NCED3的c DNA、g DNA序列。通过BLAST比对分析,发现各基因的CDS序列与转录组中的序列基本一致。比对分析获得各个基因的内含子,作为后期荧光定量分析中引物设计参考。2.分别利用Real-time PCR与ge Norm、Norm Finder、Best Keeper软件对候选内参基因在66个样品中表达稳定性进行分析。结果显示,SAMDC在所有样品中表达最稳定,在不同的实验组中,内参基因稳定性有所差异。使用Nc SUT4、Nc NCED3验证内参基因的稳定性,结果显示:使用稳定内参基因及其组合比不稳定的内参基因标准化Real-time PCR时更精准,证明了前期筛选的稳定内参基因具有准确性与可行性。3.使用筛选的内参基因标准化分析Nc SUT4在不同时间、不同组织、光合周期不同时间点中的转录表达特性,结果表明:Nc SUT4在黄梁木韧皮部、木质部、幼叶、成熟叶、根等部位均有表达。随着时间与环境的变化Nc SUT4呈时空表达特异性。