藤梨根多糖的分离纯化与活性研究

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藤梨根(Radix Actinidiae Argutae)作为一种常用抗肿瘤中药,在临床医药方面具有良好的功效。近年来,随着国内外对藤梨根研究的深入,人们陆续从藤梨根中提取出多种天然成分,其中不乏活性较高的成分。因此中药藤梨根的抗肿瘤作用越来越受到国内外研究者的重视,对其进行深入研究和开发,具有重要的科学意义和研究前景。藤梨根多糖是藤梨根中的重要抗肿瘤成分,具有显著的生物学活性。然而,目前关于藤梨根多糖的提取、分离、纯化研究报道甚少,故本论文围绕藤梨根多糖的制备工艺展开研究。首先通过正交试验筛选出藤梨根多糖提取的最佳浸提条件组合为料液比1:20、浸提温度为100℃、浸提时间为4h;预试验表明用乙醇沉淀多糖,乙醇的倍数是决定沉淀率的主要因素。经比较确定3倍体积乙醇为最佳沉淀倍数;确定最佳脱蛋白方法为Sevag法与酶解法相结合;最佳脱色方法为大孔吸附树脂。经过沸水提取,乙醇沉淀,Sevag+酶解法脱蛋白,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析,Sephacryl S-400凝胶过滤层析纯化,得到藤梨根多糖Ⅱa、Ⅱb(APSⅡa、APSⅡb);进而分析藤梨根多糖的理化性质,并利用薄层层析、红外光谱分析多糖的结构。最后在体外对纯化后藤梨根多糖组分的免疫调节活性与抗肿瘤活性进行研究。结果表明,粗品APS和组分APSⅡb对小鼠脾淋巴细胞有显著增殖作用,对肝癌细胞HepG2和肺腺癌细胞SPC-A-1的生长也有显著抑制作用,并且表现出一定的剂量依赖性;而组分APSⅠ和APSⅡa未表现出显著的肿瘤抑制作用。藤梨根多糖APSⅡb能显著地抑制癌细胞增殖,促进细胞凋亡,可能与其结构中含有β糖苷键有关。其具体的抗肿瘤机制有待进一步的研究。本文研究确定了藤梨根多糖的提取工艺,获得有活性的纯多糖组分,并对藤梨根多糖组分的体外免疫调节活性和抗肿瘤活性进行了初步探讨,为藤梨根多糖的进一步研究提供了依据,具有重要的意义。
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