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干扰素是一类多功能细胞因子，是由哺乳动物体细胞合成与分泌的潜在的生物活性蛋白质，具有抵抗病毒感染、抑制肿瘤细胞生长与调节机体免疫功能的作用。其基因表达受多种因素和调控元件的调节。干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛的关注，目前已被应用于临床治疗。 猪IFN-γ具有强烈的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用，作为生物药剂和疫苗佐剂具有广阔的应用前景。广西巴马小型猪和贵州小型猪是品种优良的地方猪种，具有较高的经济价值与实用价值。广西巴马小型猪和贵州小型猪IFN-γ基因的成功克隆和表达为猪IFN-γ的进一步研究和开发奠定了基础。 首先将广西巴马小型猪和贵州小型猪外周淋巴细胞进行体外培养，刀豆蛋白A(ConA)刺激培养后，提取培养淋巴细胞总RNA。试验结果表明，刺激培养24h提取的RNA质量最高。 参照GenBank中已报道的猪IFN-γ基因(NO：S63967)设计引物P1和P2，引物5’端分别加BamHⅠ和HindⅢ酶切位点。引物序列，P1为CGC GGA TCC ATG AGT TAT ACA ACT TAT T；P2为CGA AGC TTA AAT ATT GCA GGC AGG ATG AC。然后应用RT-PCR技术扩增γ-干扰素(IFN-γ)基因，并克隆到PMD18-T载体上，经过PCR鉴定、BamHⅠ／HindⅢ限制性酶切分析、测序证实扩增得到的IFN-γ基因序列正确。测序结果表明，与Vandenbroeck等报道的猪INF-γ cDNA的同源性为100％，与李江凌等报道的成华猪和夏春等报道的大白猪的INF-γ cDNA的同源性为99.8％，与闫丽萍等报道的猪INF-γ cDNA的同源性为99.6％。 用BamHⅠ／HindⅢ双酶切上述重组质粒载体PMD18-T-IFN-γ，胶回收纯化获得连接用IFN-γ基因片段，与经过同样双酶切的表达载体PET-22b(+)连接并转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α。PCR鉴定和酶切分析筛选阳性克隆，提取质粒，再通过热刺激法把构建的表达载体PET-22b-IFN-γ导入大肠杆菌感受态细胞BL21中，PCR分析和酶切鉴定结果表明含有IFN-γ基因的表达载体已转化到大肠杆菌BL21中。 IPTG诱导表达2-3h，取重组菌体裂解沉淀产物、重组菌裂解上清液、未经IPTG诱导的重组菌体裂解产物、经IPTG诱导的非重组菌体裂解产物，用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)来判定其分子量大小。结果表明原核表达产物为18kDa的重组蛋白，光密度扫描测定占菌体总蛋白的40％，表达产物以包涵体形式存在。