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目的建立大鼠复杂性区域疼痛综合征I型(CRPS-I)模型,观察不同频率电针对CRPS-I模型大鼠的镇痛效果,筛选优势频率电针;研究电针对外周背根感觉神经元痛敏感TRPV1通道表达的影响及对脊髓背角中星形胶质细胞和小胶质细胞活化程度的干预作用,探讨电针对CRPS-I模型大鼠镇痛作用的相关机制。方法 第一部分:1、建立大鼠慢性缺血后疼痛(Chronic post-ischemic pain,CPIP)模型,模拟复杂性区域疼痛综合征I型(CRPS-I)。健康雄性SD大鼠随机分为对照组(Sham组)、模型组(CPIP组)。通过套扎橡胶圈于麻醉大鼠右后肢3小时,形成缺血再灌注而建立CPIP模型。造模前,观察大鼠脚掌形态并分别测定模型组与对照组大鼠脚掌厚度、机械痛阈值(50%PWT)。并于造模后的15分钟-72小时测定脚掌厚度、造模后的1、3、5、7、9、11、13天测其50%PWT。2、健康雄性SD大鼠随机分为Sham+Veh组、CPIP+Veh组、Sham+Cap(Capsaicin,辣椒素,TRPV1激动剂)、CPIP+Cap组。在大鼠患侧足底注射Veh或Cap,观察其伤害性疼痛行为(注射药物后10分钟内,大鼠用于舔、咬、撤回爪子的累积时间)。3、健康雄性SD大鼠随机分为对照组(Sham 组)、模型组(CPIP 组)、CPIP+2Hz 电针组(CPIP+2Hz EA 组)、CPIP+100Hz 电针组(CPIP+100Hz EA 组)、CPIP+2/100Hz 电针组(CPIP+2/100Hz EA 组)、CPIP+假电针组(CPIP+Sham EA 组)。EA 组和Sham EA组大鼠于造模后第二天分别进行治疗。EA组治疗选用双侧“足三里(ST36)”和“昆仑(BL60)”穴,选用相应治疗频率,刺激强度0.5-1.5mA(先 0.5mA,每 10min 加 0.5mA,共 30min),30min/次。Sham EA 组针刺入穴位表皮,但不接通电。在造模前和造模后的1-7、9、1 1、13天检测双侧足爪50%PWT。第二部分:1、将健康雄性SD大鼠随机分为Sham组、CPIP组、CPIP+100Hz EA组、CPIP+Sham EA,经电针治疗后,采集大鼠患侧背根神经节(DRG)组织,应用免疫荧光检测大鼠患侧DRG中的TRPV1表达。2、健康雄性SD大鼠随机分为Sham组、CPIP组、CPIP+2Hz EA组、CPIP+100Hz EA组、CPIP+Sham EA组。于模后第13天采集各组大鼠脊髓组织,应用免疫荧光检测患侧脊髓背角(SCDH)胶质细胞标记物(GFAP标记星形胶质细胞、OX42标记小胶质细胞)表达水平。结果第一部分:1、模型制备成功:从形态而言,与健侧相比,CPIP组大鼠于造模时患侧脚掌出现明显紫绀,并于剪断O形环后,出现明显充血、肿胀。造模后,相比Sham组,CPIP大鼠患侧脚掌厚度明显增加,在模后48小时恢复正常。从模后第1天起,CPIP组大鼠50%PWT相比Sham组出现显著下降,并且一直持续到13天的观察期结束。2、CPIP大鼠对辣椒素引起的疼痛反应明显增强。Veh注射引起Sham组表现出轻微伤害性疼痛行为,而CPIP组伤害性疼痛行为显著高于Sham组。辣椒素注射引发Sham组出现强烈伤害性疼痛行为,而CPIP组大鼠则表现出更为强烈的伤害性疼痛行为。3、电针对CPIP大鼠双侧足爪的抗机械痛过敏效果呈一定频率依赖性。2Hz电针对CPIP模型大鼠患侧足爪在治疗开始时表现出镇痛作用,但随时间推移镇痛效果逐渐下降。100和2/100Hz电针在治疗全程对CPIP模型大鼠患侧足爪均表现出显著镇痛效果。而假电针没有明显镇痛效果。此外,电针治疗对健侧足爪也有相似镇痛作用。第二部分:1、100Hz电针能够逆转CPIP大鼠患侧DRG中痛敏感TRPV1通道蛋白过表达。与Sham组相比,CPIP组DRG神经元(NeuN+)中,TRPV1阳性表达的比例明显高于Sham组,而与Sham EA组相比,EA组DRG神经元中TRPV1 B性表达比例明显低于Sham EA组。2、不同频率电针能够不同程度地干预CPIP大鼠患侧脊髓胶质细胞活化。与Sham组相比,CPIP组患侧SCDH中GFAP(星形胶质细胞标记物)免疫活性和GFAP 阳性细胞数量均显著增加。相较Sham EA组,100Hz EA治疗显著降低患侧SCDH中GFAP免疫活性及GFAP 阳性细胞数量,而2Hz电针对GFAP活化无明显作用。同时OX42(小胶质细胞标记物)出现类似变化。结论第一,我们成功建立了大鼠CPIP模型。该模型大鼠患侧足爪表现出明显肿胀,并表现出明显机械痛过敏症状以及对局部辣椒素注射表现出更为强烈的伤害性疼痛行为。第二,2Hz电针仅在开始时对CPIP模型大鼠的机械痛过敏表现出镇痛作用,然而镇痛效果随时间延长逐渐下降。100Hz电针和2/100Hz电针可以持久有效地对CPIP模型大鼠机械痛过敏发挥镇痛效果。第三,电针可以有效逆转CPIP模型大鼠患侧DRG中TRPV1通道的过表达。第四,不同频率电针对CPIP模型大鼠患侧SCDH中胶质细胞活化程度的干预程度不同:2Hz电针不能有效降低胶质细胞的活化程度,而100Hz电针能够显著降低脊髓胶质细胞的活化程度。这一现象与我们所观察到的动物行为学结果相一致。