皮肤恶性黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤，其发病机制尚未阐明，目前已明确存在多个异常信号转导途径。c-KIT为原癌基因c-KIT编码的受体酪氨酸激酶家族成员，其活化与多种恶性肿瘤的发生、发展和转移均有关。甲磺酸伊马替尼可选择性抑制c-KIT、c-ABL、PDGFR等酪氨酸激酶，从而发挥抗肿瘤作用。近期国外研究发现在黑素瘤中存在c-KIT基因的活化性突变，本研究旨在探讨c-KIT在我国黑素瘤发病机制中的作用，并探讨甲磺酸伊马替尼对体外培养黑素瘤细胞增殖和凋亡的影响。　　 第一部分皮肤恶性黑素瘤c-KIT蛋白表达和c-KIT基因突变研究　　 目的:探讨皮肤恶性黑素瘤和色素痣中c-KIT蛋白的表达以及黑素瘤组织中c-KIT基因和BRAF基因的突变情况。　　 方法:采用免疫组化方法分析24例原发性皮肤黑素瘤、4例转移性黑素瘤及20例良性色素痣组织中c-KIT的表达情况，采用PCR扩增和直接测序检测22例皮肤黑素瘤c-KIT基因11号、13号外显子突变和BRAF基因15号外显子突变。　　 结果:原发性皮肤黑素瘤c-KIT阳性表达率(88％)明显高于色素痣(55％)和转移性黑素瘤(25％)，阳性表达位于细胞膜和细胞质。在肢端黑素瘤(2/15)和慢性光损伤部位黑素瘤(1/3)中存在c-KIT基因突变(L575P和K642E)，肢端黑素瘤(2/15)和非慢性光损伤部位黑素瘤(2/2)存在BRAF基因突变(V600E)。肿瘤中未见c-KIT和BRAF基因突变共同存在。　　 结论:c-KIT蛋白在原发性皮肤黑素瘤表达明显升高，c-KIT基因在部分原发性肢端和慢性光损伤部位黑素瘤存在突变，提示c-KIT在黑素瘤的发病机制中起一定作用。　　 第二部分甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞c-KIT表达及增殖的影响　　 目的:探讨甲磺酸伊马替尼对体外培养黑素瘤细胞系c-KIT表达及细胞增殖的影响。　　 方法:采用免疫细胞化学和Western印迹法检测人黑素瘤M14细胞和小鼠黑素瘤B16F10细胞中c-KIT的表达，MTT法分析5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L三种浓度甲磺酸伊马替尼对M14细胞和B16F10细胞生长抑制作用，Western印迹法观察M14细胞c-KIT蛋白和p-c-KIT蛋白的表达情况。　　 结果:c-KIT在M14细胞表达，在B16F10细胞中无表达；5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L甲磺酸伊马替尼均能抑制M14细胞的增殖，随着浓度的升高其抑制作用增强；20μmol/L和10μmol/L甲磺酸伊马替尼能抑制B16F10细胞的增殖，5μmol/L甲磺酸伊马替尼对细胞无影响。三种浓度甲磺酸伊马替尼均能抑制M14细胞p-c-KIT蛋白的表达，但对c-KIT蛋白无影响。　　 结论:甲磺酸伊马替尼能抑制M14细胞的增殖，机制可能与抑制c-KIT的磷酸化有关。　　 第三部分甲磺酸伊马替尼对人黑素瘤M14细胞凋亡的影响　　 目的:探讨甲磺酸伊马替尼对体外培养黑素瘤M14细胞凋亡的影响。　　 方法:采用Annexin-V/PI法和TUNEL法观察5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L甲磺酸伊马替尼对M14细胞凋亡的诱导情况，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化，DAPI染色观察细胞凋亡形态变化，Western印迹分析检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。　　 结果:5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L甲磺酸伊马替尼均能不同程度的诱导M14细胞凋亡，细胞周期显示细胞阻滞在S期。20μmol/L甲磺酸伊马替尼作用M14细胞96h后可上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达。　　 结论:甲磺酸伊马替尼能影响M14细胞周期进程，并诱导细胞凋亡，可能与活化线粒体凋亡途径有关。