TSHR(G558R)突变调节鸡热应激反应的分子机制

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本试验旨在筛选调节鸡热应激反应的候选基因,并研究TSHR基因G558R突变调节鸡热应激反应的分子机制。首先从数据库下载热带和温带地方鸡(5种热带鸡共30只,3种温带鸡共26只),利用比较群体基因组学法(Fst和Pi),检测热带鸡的正选择基因,筛选出TSHR基因,该基因在41020238处发生了G/A突变,导致第558位甘氨酸突变为精氨酸。为进一步验证TSHR基因G558R突变调节鸡热应激反应的作用,构建了TSHR基因突变型、野生型和空载体表达载体,并转染成纤维细胞,分别在28℃、37℃和43℃下培养5h。利用CCK8法测定不同培养温度下的细胞活力,同时提取37℃培养温度下细胞的RNA建库进行RNA-seq,分析过表达不同基因型载体的差异表达基因。最后对TSHR基因G558R突变调节鸡热应激反应进行活体验证。选取TSHR基因突变位点为杂合型个体的淮南麻黄鸡公母鸡各9只和81只,按公母比例为1:9配种,收集种蛋约500枚,系谱孵化。将试验群体划分为突变型组(n=64),野生型组(n=54)以及杂合型组(n=128),记录体重和体尺。20周龄时从突变型组、野生型组中各随机挑选出30只公鸡,分为突变型热应激组、突变型对照组、野生型热应激组及野生型对照组,每组各15只,热应激条件为33±1℃(20:00-次日8:00),测定屠宰性能和肉品质。同时采集突变型及野生型鸡热应激前后的血液,进行血液生化指标的测定。研究不同基因型鸡热应激反应的差异。结果表明:热带鸡中有34个受到正向选择的基因,其中TSHR基因发生了错义突变。在细胞水平验证试验中,发现虽然在28℃和37℃的处理温度下,突变型组的细胞活力显著低于野生型组(P<0.05),但是在43℃处理温度下,突变型组的细胞活力显著高于野生型组和空载体组(P<0.05)。对野生型组与空载体组共筛选出5个差异表达基因,其中野生型组中有2个基因上调,3个基因下调;对野生型组与突变型组共筛选出16个差异表达基因,在突变型组中全部上调。这些基因主要富集于体温调节、炎症反应及脂质代谢的通路。在活体水平验证试验中,两组鸡在体重、体尺和屠宰性能上无显著差异(P>0.05)。野生型热应激组的a*比突变型热应激组低21.0%(P<0.05),野生型热应激组和突变型热应激组的滴水损失和蒸煮损失均显著高于其对照组(P<0.05)。突变型热应激组ALT、LDH和CK显著低于野生型热应激组(P<0.05),其他血液生化指标差异不显著(P>0.05)。综上所述,TSHR基因G558R突变可作为调节鸡热应激反应的候选基因,可能是通过上调细胞炎症反应及热休克蛋白相关基因表达来调节鸡的热应激反应。
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