通过实验研究，本论文建立了用高效液相色谱法同步测定饲料中4种脂溶性维生素5种形态化合物的方法。本方法以饲料为基质，以维生素K<,3>、维生素A乙酸酯、维生素D<,3>、维生素E、维生素E乙酸酯为目标对象进行分析。与传统皂化法不同的是，本实验使用了一种商品名为Savinase的酶破坏维生素表面的包被物质而使维生素游离出来，然后用无水乙醇提取这些游离的维生素。在酶解的过程中，使用了0.2％的氨水溶液为维生素K<,3>从其常用的商品剂型呈水溶性的亚硫酸氢钠甲萘醌中游离出来，解决了饲料中的维生素K<,3>与其他脂溶性维生素同步提取的问题。经酶解处理过的样品液在固相萃取小柱净化后，上机。维生素经配有保护柱的Atlantis dC18色谱柱分离，以甲醇和水(98：2，v/v)为流动相洗脱，并以1.0 mL/min的流速经紫外-可见光检测器在230 nm和265 nm处检测，16分钟内完成分离过程，方法的检测限为2.0-42.0 mg/kg，回收率为87-130％，变异系数小于10％。本方法最大的优点是快速、操作简便，使用了弱毒性的乙醇作萃取剂并适用于维生素添加剂、多维、预混料等饲料中脂溶性维生素的检测。