黑腹果蝇防御素基因功能的改造及CG13422、Dro、Dpt以及Mtk的抗性研究

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抗菌肽是昆虫感染细菌后,由血细胞及脂肪细胞在瞬时分泌的抗菌物质。具有广谱抗菌活性和抑杀耐药菌株等优点。抗菌肽不仅具有广泛的抗菌谱,对于某些细菌、真菌、病毒、病原虫甚至是肿瘤都具有一定的杀灭或抑制作用,也可以达到帮助加速伤口愈合作用。防御素是一类在自然界中广泛存在的、具有微生物抗性的小分子抗菌肽。经过定向基因改造技术,使特定防御素基因获得更大的抑菌效果以及长效的抑菌优势。同时对CG13422、Dro、Dpt以及Mtk这几个基因的抗菌性进行研究,利用PCR技术,以果蝇总DNA为模板,扩增出两端加入了连接接头的防御素基因,将接头处理成粘性末端,将防御素基因与分泌型酵母表达载体pHBM905A重组,构建重组酵母表达载体pHBM905A/目的基因,经“三明治”夹心平板筛选及菌落PCR鉴定证明目的基因已整合入酵母染色体中。挑选到了阳性克隆后采用甲醇进行诱导表达,然后进行SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析,最后采用琼脂糖扩散法对上清液的生物学或从进行检测。防御素的定点改造得到了良好的抗菌性菌株,但是传代性能极弱。CG13422、Dro、Dpt以及MtK这几个可能的抗性基因暂时没有发现抗菌性,但是为后期的实验提供了借鉴基础。
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