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目的piRNA作为非编码小RNA(small non-coding RNA,sncRNA)家族的一员,参与基因表达调控。piRNAs在组织损伤中作用已有广泛研究,但piRNAs在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用尚未报道。本文旨在检测piR-hsa-1282在AKI患者血清标本和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人肾小管上皮细胞HK-2和人胚肾细胞293T急性损伤中的表达,探讨piR-hsa-1282参与急性肾损伤发展的作用机制。同时检测不同急性肾损伤小鼠模型中piR-mmu-36656450(piR-hsa-1282的小鼠同源性序列)表达情况,并分析其表达水平与肾损伤程度的相关性,揭示piR-hsa-1282/piR-mmu-36656450作为诊断标志物的潜在价值,为临床治疗急性肾损伤提供新靶点。方法建立piR-hsa-1282/piR-mmu-36656450的实时荧光定量RT-PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测方法,通过测序验证引物的特异性和扩增的有效性。收集临床AKI患者的血清标本并检测piR-hsa-1282表达水平。在此基础之上,体外建立LPS诱导HK-2/293T细胞急性损伤模型并检测piR-hsa-1282表达变化。采用抑制剂下调piR-hsa-1282在HK-2/293T细胞中的表达并验证其敲减效率。蛋白质免疫印迹分析piR-hsa-1282干扰前后凋亡、炎症相关蛋白的表达变化。利用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)检测HK-2细胞凋亡水平的改变。通过RBPDB数据库筛选预测piR-hsa-1282的下游靶点,采用RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)和免疫荧光实验检测下游相关信号通路蛋白水平。此外,利用盲肠结扎穿刺方法(cecal ligation and puncture,CLP)和顺铂构建两种不同AKI小鼠模型,以0,6,12,24h为时间节点建立CLP诱导AKI小鼠动态模型,以0,3,5d为时间节点建立顺铂诱导AKI小鼠动态模型。qRT-PCR检测piR-mmu-36656450在两种AKI小鼠模型中表达水平的动态改变。结果qRT-PCR和测序结果表明piR-hsa-1282/piR-mmu-36656450引物具有良好的特异性,在肾脏组织中有稳定的表达。与健康人相比,临床AKI患者血清中的piR-hsa-1282表达明显升高(P<0.05)。piR-mmu-36656450在CLP和顺铂诱导的AKI小鼠模型中表达水平也明显升高(P<0.05)。不同浓度(0、1、5、10、20、100μg/mL)LPS刺激HK-2/293T细胞后,CCK-8法检测发现细胞增殖明显抑制,cleaved caspase3和炎症因子IL-6表达增强,qRT-PCR检测发现piR-hsa-1282表达量上调,并且在20μg/mL达到峰值。抑制剂干扰后,piR-hsa-1282表达降低。western blot检测显示干扰piR-hsa-1282后,HK-2/293T细胞中cleaved caspase3、cleaved caspase9和IL-1β蛋白表达量明显下调。TUNEL实验分析敲减piR-hsa-1282后HK-2细胞凋亡明显减弱。RIP实验表明piR-hsa-1282可与FUS蛋白结合。免疫荧光结果显示敲减piR-hsa-1282抑制NF-κB p-P65入核。另外,在CLP-AKI小鼠动态模型中,HE切片结果显示,12h时小鼠肾小管出现明显的空泡,24h时肾小管空泡和坏死更为严重。血清BUN、Cre水平呈现逐渐增高的趋势。免疫荧光技术检测发现cleaved caspase3随着受损时间延长表达量增高。在顺铂诱导的AKI小鼠动态模型中,HE染色显示,5d时肾小管的空泡坏死最为明显。血清BUN、Cre水平和肾脏组织cleaved caspase3表达量在5d时最高。qRT-PCR检测发现piR-mmu-36656450表达水平在CLP-AKI和顺铂诱导AKI小鼠动态模型中呈时间依赖性增高。结论piR-hsa-1282在肾损伤状态下呈高表达状态,且其表达水平与肾损伤程度密切相关。piR-hsa-1282可能通过靶向作用于FUS蛋白,从而使得NF-κB信号通路活化,进而正向调节AKI发展进程。