论文部分内容阅读
腺苷脱氨酶(adenosinedeamiase，ADA)是嘌呤核苷酸代谢的必需酶，催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷。腺苷脱氨酶抑制剂能抑制腺苷脱氨反应，调节胞内腺苷及脱氧腺苷水平，与腺苷类药物联合使用时，可抑制腺苷类药物在体内的降解和提高其化疗效果。因此，腺苷脱氨酶抑制剂有广泛的医药开发潜力。本研究从虫草提取液中提取分离天然腺苷脱氨酶抑制剂，研究其对腺苷类药物的保护效果，为开发腺苷类药物保护剂和相关治疗药物打下基础。 1.虫草提取液中的ADA抑制剂单体的分离。本研究通过硅胶柱层析、薄层层析和正相与反相高效液相色谱法对虫草提取液中的活性单体物质进行分离，用大肠杆菌腺苷脱氨酶催化腺苷脱氨的反应来检测各分离组分对腺苷脱氨酶的抑制活性。经反复多次的薄层层析分离纯化和ADA活性分析，获得了单一条带的高ADA抑制活性的物质。经HPLC和MS分析，表明活性物质为不稳定的化合物，未能鉴定其结构。 2.柱层析法分离和制备ADA抑制剂。分别研究了在中性和碱性条件下，用聚酰胺柱层析法分离和制备虫草提取液中的ADA抑制剂。结果表明：在碱性条件下通过聚酰胺柱层析法可分离和制备无虫草素的ADA抑制剂组分。其最佳分离条件是，在碱性条件下水洗6BV，将虫草素洗脱，再用80％乙醇的洗脱，减压浓缩80％乙醇沈脱相，经干燥可获得无虫草素的ADA抑制剂。酶抑制活性分析表明，该抑制剂在浓度为0.8mg/ml时，有较高的抑制活性。浓度大于0.8mg/mL时，随着抑制剂浓度的增加，ADA抑制活性显著增加。 3.虫草提取液中相关组分的分析与鉴定。利用LC-MS和HPLC对虫草提取液中相关组分进行了系统的分析和成分鉴定。LC-MS分析获得了14个分离良好的分子离子峰，经系统检索和与标准物质的HPLC比对，鉴定其中的4个化合物为虫草素、腺苷、腺嘌呤和酪氨酸，另有4个分子离子峰[M+H]+分别为438.0、437.1、438.0、438.0，根据碎片信息等初步鉴定为同一化合物militarinonesB。其余几个化合物待鉴定。