TGF-β1在胃癌的表达及其与collagen基因家族、EGRI表达的关系

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目的 本实验将研究TGF-β1在胃癌细胞系、胃癌组织表达,TGF-β1与胃黏膜癌变及肿瘤发生发展的关系;在胃癌细胞系TGF-β1与collagen基因家族成员、EGRl表达的关系,从而为肿瘤的分子分型和临床预后判断提供依据。 方法 本项研究分别选取七个胃癌细胞系BGC823、MGC803、PC7901、PAMC82、AGS、MKN45和N87,选取84例胃癌组织标本和67例正常组织标本为研究对象,利用RT-PCR、组织微阵列免疫组化染色、免疫荧光、western blot验证了TGF-β1在胃癌细胞系及胃癌组织差异表达,并结合临床资料分析该基因表达改变与胃癌临床生物学行为及预后的关系。当用TGF-β110ng/ml处理胃癌细胞系后,检测了collagen基因家族成员、EGRl表达水平改变。 结果 (1)在胃癌细胞系中,RT-PCR结果表明,TGF-β1 mRNA在胃癌细胞系有明显差异表达,其中在AGS、MKN45和N87表达水平较低,在BGC823、MGC803、GC7901和 PAMC82表达水平较高。Western blot结果表明,TGF-β1蛋白在胃癌细胞系有明显差异表达,与RT-PCR结果一致。免疫荧光染色进一步发现TGF-β1蛋白在胃癌细胞系主要定位于胞浆。在胃癌组织中TGF-β1 mRNA.在胃癌组织表达高于配对正常组织(p=0.0062)。免疫组化结果进一步表明,TGF-β1蛋白在胃癌组织主要定位于胞浆,TGF-β1在胃癌组织表达免疫组化结果结合临床资料分析表明,TGF-β1差异表达与肿瘤的分期、分化程度和肿瘤定位无关,但与肿瘤肝转移有关(p=0.000)。(2)吕有勇教授实验室前期工作利用DGED生物信息分析手段和ollgo基因芯片技术建立了两个胃癌基因表达谱,其中发现collagen基因家族中CIL2A1在胃癌组织中表达降低,COL3AI、COL4A1、COL5A2、COL6A3在胃癌组织中表达都增高,本实验利用RT-PCR进行了验证与芯片结果一致。(3)TGF-β1以10ng/ml浓度处理胃癌细胞系AGS、MGC803后发现,COL3AlmRNA在.AGS细胞系没有表达,在处理803细胞系后表达没有变化;CO- L4AlmRNA在处理.AGS细胞系24小时、48小时表达增高,在处理803细胞系48小时、72小时表达水平增高;COLSA2 mRNA在处理.AGS细胞系后12小时、24小时、48小时后表达增高,在处理803细胞系48小时增高、72小时增高明显;EGRl在处理803细胞系后48小时后mRNA水平增高明显。 结论 (1)TGF-β1基因在胃癌细胞系有明显差异表达,可能与肿瘤恶性程度相关。(2)TGF-β1在胃癌细胞系可促进COL4Al、COLSA2的表达增加,可能与胃癌晚期转移有关(3)TGF-β1与EGRl在肿瘤细胞系可能存在相互调节的作用。
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