水稻六个miRNAs表达载体的构建和遗传转化

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MicroRNAs(miRNAs)是真核生物中一类非编码长约为19-23nt的RNA,通过与靶mRNA的互补配对,介导mRNA降解或抑制其翻译,从而调控靶基因的表达。已有的研究表明miRNAs调控对象主要为转录因子和植物激素信号转导途径中的蛋白。因此miRNAs在植物生长发育及对环境应答等过程中有着非常重要的作用。水稻杂交优势机理在分子水平上也往往体现在转录因子表达水平和植物激素水平变化。miRNAs调控的靶标基因和杂交优势相关的基因有很大的重叠,这暗示了miRNA可能在杂交优势中发挥重要作用。本实验从前人杂交优势性状QTL定位的区间中,选取包含于区间的miRNA,试图找到杂交优势性状与miRNA的联系。本实验构建了Os-miR166b、167a、445、813、1428e、1861i的过表达载体,利用农杆菌介导法转化水稻愈伤组织并获得了转基因水稻苗;GUS染色鉴定报告基因显示目的基因已整合到水稻基因组中。运用生物信息学方法筛选了以上miRNAs的靶标,为进一步实验验证miRNAs的功能打下了基础。T0代转化植株表型观察,发现miR813过表达植株结实率显著下降,I2-KI染色后显微镜下观察到花粉育性明显下降。miR167过表达植株片长宽比和野生型相比变小,叶片长度变长、宽度增加,形状短而宽。
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