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研究背景:胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率均较高。目前对进展期和胃癌术后复发患者的治疗效果不佳，其中的原因之一是我们对其发生的分子机制认识不够全面，而寻找可以广泛用于临床的、高效的、特异的分子标记物，用于胃癌早期诊断及预后判断，将成为胃癌研究分子生物学领域的重要方向。最近的研究发现，miRNAs是基因表达的负性调控因子，miRNAs具有癌基因或者抑癌基因的活性，通过对靶基因的调控，从而参与调节细胞的生长、周期及迁移等过程;同时，miRNAs在组织、血清及其他一些体液中还具有较好的稳定性。因此，miRNAs有成为肿瘤生物标记的广阔前景，对于胃癌的早期诊断及治疗有深远的临床意义。 目的:检测miR-199a-5p在人胃癌细胞株(MKN-45、MKN-28、SGC-7901、BGC-823、HGC-27、AGS)、人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及人胃癌组织中的表达，探讨miR-199a-5p对人胃癌细胞MKN-45、MKN-28及AGS、BGC-823侵袭和迁移的影响，miR-199a-5p对klotho蛋白表达的调控。 方法:按照TRIzol试剂盒说明书的步骤提取34例新鲜胃癌组织及其配对的癌旁正常胃黏膜组织的总RNA，同样提取人胃癌细胞株(MKN-45、MKN-28、SGC-7901、BGC-823、HGC-27、AGS)及人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1的总RNA，使用SuperscriptⅢ cDNA synthesis kit试剂盒合成cDNA，应用实时定量RT-PCR方法检测miR-199a-5p的表达水平。 以6孔培养板行细胞铺板，每孔接种5.0×105个细胞，在37℃、5％CO2培养箱静置培养24小时。按Lipofectamine2000说明书将miR-199a-5p inhibitor及阴性对照inhibitor negative control转染入MKN-45、MKN-28，将miR-199a-5pmimic及阴性对照mimic negative control转染入AGS、BGC-823;转染24后后，行transwell实验，观察细胞迁移、侵袭能力。 荧光素酶报告基因检测系统验证miR-199a-5p的靶基因。 按照原位杂交检测试剂盒及免疫组织化学通用型SP系列工作液试剂盒说明书的步骤进行操作，分别检测miR-199a-5p及klotho蛋白在103例石蜡固定的人胃癌组织标本中的表达情况。 结果: 1).miR-199a-5p在61.2％(21/34)的胃癌组织中高表达，人胃癌细胞株 MKN-45、MKN-28、SGC-7901、BGC-823、HGC-27和AGS中miR-199a-5p的表达水平高于其在人胃黏膜上皮细胞株GES-1中的表达，其表达水平为MKN-45＞ MKN-28＞HGC-27＞SGC-7901＞AGS＞BGC-823＞GES-1。 2).miR-199a-5p inhibitor抑制MKN-45、MKN-28细胞的迁移、侵袭活性，miR-199a-5pmimic增强BGC-823、AGS细胞的迁移、侵袭活性。 3).荧光素酶报告基因检测证实klotho是miR-199a-5p的靶基因。 4).原位杂交显示miR-199a-5p主要在胃癌细胞的胞浆表达，阳性表达率为63.1％(65/103)，其表达强度与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期有关，而与性别、Lanren分型、分化程度、组织学类型及远处转移无关; 免疫组织化学显示Klotho蛋白主要在胃癌细胞的胞浆表达，阳性表达率为59.2％(61/103)，其表达强度与淋巴结转移、远处转移和TNM分期有关，而与性别、肿瘤大小、Lanren分型、分化程度及组织学类型无关。 Spearman秩相关分析表明胃癌组织中miR-199a-5p与klotho蛋白表达水平呈负相关联。 结论:miR-199a-5p是胃癌的一个癌基因，通过调控其靶基因klotho的表达来实现。