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植物在激发子的诱导处理下,可以产生如下的防卫反应:活性氧爆发、次生代谢产物累积和抗性基因的表达等,这些抗病因素共同抵御病原物的侵入和扩散。由于橡胶树高大生育期长,其相关基础性或机理性研究相对滞后。悬浮细胞培养作为植物生物技术中一种研究手段,由于其分散性佳,生长快速,方便控制,已被广泛用于各个方面的科学研究。因此,研究建立橡胶树悬浮细胞系有利于加快相关研究进程。本研究通过摸索建立橡胶树悬浮细胞系,研究核黄素激发橡胶树悬浮细胞系的防卫反应,为明确橡胶树抗病防卫机制和培育抗病品种提供理论基础与科学依据。本实验主要研究结果如下:1、以橡胶树品系7-33-97花药经诱导培养基诱导后获得的胚性愈伤组织为材料,通过对2,4-D、NAA和KT等关键激素及主要碳源蔗糖的最适浓度筛选,得到了改良的MS培养基,建立起了稳定的悬浮细胞系,作为后面实验开展的主要材料;结果表明,采用添加1.0mg/L的2,4-D、0.5mg/L的NAA、1.5mg/L的KT、30g/L的蔗糖的MS培养液,在此营养环境下,得到的悬浮细胞系稳定、生长速度佳,为后续实验需要大量的实验材料提供有效的保障;悬浮培养液的pH值变化与细胞生长速率存在某种程度的关联,当悬浮细胞处于快速生长的对数期期间,悬浮培养液的pH值是逐步升高的,当悬浮细胞生长速度减缓时,培养时间长,悬浮培养液的pH值开始走下降趋势。因此,为建立起稳定、快速生长的橡胶树悬浮细胞系,6～8d继代一次最佳。2、以橡胶树7-33-97悬浮细胞为材料,用核黄素进行诱导处理,并初步探索了其诱导机制。结果表明,核黄素处理橡胶树7-33-97悬浮细胞后,产生了活性氧迸发,这过程可以被钙离子通道抑制剂LaCl3抑制;核黄素诱导橡胶树7-33-97悬浮细胞,可以提升细胞外的培养液pH值使得胞外环境碱性程度高,该过程能被蛋白激酶抑制剂K252a小幅抑制,这显示了蛋白质的磷酸化体现在了此抗病过程的传导;苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)的活性被诱导而明显升高;核黄素诱导了防卫相关基因HbPR-1和HbNPR1的表达,说明核黄素能够激活橡胶树品系7-33-97悬浮细胞产生抗病防卫反应,该抗病信号传导的途径可能是通过水杨酸信号通路进行的。