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背景与目的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的沉积是多种慢性肝病进展为肝硬化的中间过程。活化的肝星状细胞(Hepatic stellate cells,HSC)是ECM的主要来源,HSC活化是肝纤维化形成的中心环节。脂氧素A4(Lipoxin A4,LXA4)及其类似物BML-111具有抗纤维化作用,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨Lipoxin A4对HSC细胞活化的影响及其机制。实验方法:1实验分组,大鼠HSC-T6细胞购自Procell Company(中国武汉)。首先,我们设定不同浓度的Lipoxin A4(6组)研究Lipoxin A4对LPS诱导的HSC活化的影响。LPS(10ng/ml)和不同浓度Lipoxin A4(0-400ng/ml)共同处理HSC-T6细胞24小时。由于Lipoxin A4的溶剂是乙醇,为了消除乙醇的影响,对照组和LPS组中分别加入等量乙醇。然后,我们将大鼠HSC-T6细胞随机分为以下四组:(1)对照组:加入PBS(LPS溶剂)和0.2%乙醇(Lipoxin A4溶剂),孵育24 h。(2)LPS组:加入LPS(10ng/ml)和0.2%乙醇,孵育24 h。(3)Lipoxin A4组(Lipoxin A4+LPS):先加入Lipoxin A4(200ng/ml),15 min后再加入LPS(10ng/ml),孵育24 h。(4)Lipoxin A4受体阻断剂组(BOC-2+Lipoxin A4+LPS):先加入阻断剂BOC-2(10μmol/L),间隔15 min后加入Lipoxin A4(200ng/ml),再间隔15 min最后加入LPS(10ng/ml),孵育24 h。2观察Lipoxin A4对HSC-T6细胞活化的影响及其可能机制(1)羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)试剂盒评估ECM的沉积水平。(2)Western Blot检测α-SMA,Collagen Ⅰ和Ⅲ,MMP-2,MMP-9,TGF-β1,PDGF A和B,核因子κB(Nuclear factor-kaapa B,NF-κB)NF-κB p65,磷酸化NF-κB p65(p-p65)以及NF-κB抑制剂α(I-κBα)蛋白的表达水平。(3)real-time PCR法检测MMP-2和MMP-9的m RNA表达水平。(4)酶联免疫吸附法(ELISA)检测TGF-β1和PDGF的分泌水平。(5)NF-κB核转位试剂盒观察和评估NF-κB的激活和转位情况。结果:1.LPS激活HSC-T6细胞,并上调α-SMA的表达水平,Lipoxin A4明显抑制LPS诱导α-SMA表达水平。2.Lipoxin A4抑制LPS诱导Hyp生成,下调LPS诱导的Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、MMP-2和MMP-9。3.Lipoxin A4减少LPS诱导TGF-β1和PDGF分泌和表达。4.Lipoxin A4抑制LPS激活的NF-κB信号通路,减少I-κBα降解、降低NF-κB磷酸化程度,最终导致NF-κBp65核转位减少。5.Lipoxin A4受体阻断剂BOC-2抑制Lipoxin A4的上述效应。结论:Lipoxin A4抑制HSC细胞活化,此效应可能通过减少促纤维化细胞因子TGF-β1和PDGF,以及抑制NF-κB信号通路而实现。