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NAGase被证实在生殖方面发挥重要功能,但因其特异性的抑制剂对精子毒性大,限制了其功能方面的研究。本研究围绕金华猪NAGase的理化性质和几种抑制剂的抑制机理展开研究,旨在为NAGase抑制剂的筛选提供数据支持。本试验以金华猪精液作为材料,采用硫酸铵分级沉淀,CM阳离子交换柱层析（CM Sepharose Fast Flow）与葡萄糖凝胶G-100分子筛层析柱（Sephadex G-100）的方法进行分离纯化,最终得到比活力为1969.158 U·mg-1的酶制剂。酶制剂经PAGE法检测仅有一条条带,得到的酶为PAGE单一纯。酶制剂经SDS-PAGE法检测结果表明该酶仅有一种亚基。进一步进行理化性质研究发现,当p H为6.0时,金华猪精液NAGase的酶活力最高,p H在4～7.5之间时酶催化底物的稳定性较好,当p H达到9.0时NAGase酶活性完全丧失。该酶在55℃时酶活力最高,在10℃～60℃之间酶活力较为稳定,当温度超过70℃时,酶完全失活。运用化学修饰法对金华猪精液NAGase活性中心功能基团研究发现,半胱氨酸的巯基、赖氨酸的氨基、蛋氨酸的硫醚基、二硫键、羧基是金华猪精液NAGase活性中心的必需基团。而对酶的精氨酸的胍基与组氨酸的咪唑基进行化学修饰并不会改变酶活性,说明它们不是该酶的活性中心功能基团。本研究进一步研究了N-乙酰基咪唑、NAG与Thiamet-G对金华猪精液NAGase的活性影响。结果表明,N-乙酰基咪唑、NAG和Thiamet-G对酶活性均有抑制作用。其中,N-乙酰基咪唑的抑制类型属于不可逆抑制,NAG与Thiamet-G对金华猪精液NAGase的抑制类型混合抑制。通过构建Thiamet-G对金华猪的抑制动力学模型,获得金华猪精液NAGase在Thiamet-G溶液中的微观抑制速度常数:k+综上所述,金华猪精液中NAGase由一种亚基组成,其最适温度、p H分别为55℃和6.0。半胱氨酸的巯基、赖氨酸的氨基、蛋氨酸的硫醚基、二硫键与羧基为该酶活性中心的必需基团。N-乙酰基咪唑、NAG与Thiamet-G对该酶均有抑制作用。