【摘 要】
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内生菌与植物长期互利共生,并在植物生长发育、抗逆和病虫害防御等生物学过程中发挥着重要作用,有作为“植物疫苗”的潜力,从而减少化肥和农药施用。然而,内生菌与植物的互作关系尚不明晰,限制了其推广应用。因此,深入研究植物与内生菌的互作关系,将为作物田间营养管理和病虫害的综合防控提供新的思路。本研究旨在从药用植物马比木(Nothapodytes pittosporoides)分离筛选获得的一批具有抗病促生
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内生菌与植物长期互利共生,并在植物生长发育、抗逆和病虫害防御等生物学过程中发挥着重要作用,有作为“植物疫苗”的潜力,从而减少化肥和农药施用。然而,内生菌与植物的互作关系尚不明晰,限制了其推广应用。因此,深入研究植物与内生菌的互作关系,将为作物田间营养管理和病虫害的综合防控提供新的思路。本研究旨在从药用植物马比木(Nothapodytes pittosporoides)分离筛选获得的一批具有抗病促生效果的菌株中,选取一株内生砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)为研究对象。通过对菌株处理后的马铃薯及其离体叶片接种晚疫病致病疫霉菌(Phytophthora infestans),并对其病情指数、生理指标进行统计,探究菌株对马铃薯的促生长作用及对晚疫病的防治效果。进一步构建菌株的遗传转化体系,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记菌株。基于此,通过染色、激光共聚焦显微镜观察真菌与植物互作过程,明确菌株的作用部位;并通过RT-qPCR检测真菌在马铃薯中的相对定殖量,探究真菌对马铃薯生长及防御相关激素基因的表达模式,以及真菌对根系土壤活力的影响,从而共同揭示真菌对马铃薯促生及防病的生理学基础。主要研究结果如下:1.砖红镰刀菌显著促进了马铃薯的生长。其中菌株处理组的株高、总生物量、主根数、根生物量相较于对照清水处理分别提高了1.25、1.19、2.3、1.47倍。2.砖红镰刀菌增强了马铃薯对晚疫病的抗性。其中马铃薯晚疫病生测试验的结果发现,对照清水处理组感病率为87.5%;砖红镰刀菌处理组感病率为37.5%。叶片病情指数分析发现,菌株处理组的叶片病斑、叶片损伤面积比分别为2.24cm2和11.22%,均显著低于对照清水处理(4.14 cm2和24.94%)。3.砖红镰刀菌介导植物激素相关基因表达。其中处理组植株生长素合成相关基因(StYUC5)显著上调,而免疫相关激素茉莉酸和水杨酸合成相关基因(StPI-I、StPAL和StPR1A)也有不同程度上调。4.构建了载体pK2-hyg-gpdA::gfp,获得GFP标记菌株,并对遗传转化条件进行了优化,获得最佳转化条件。5.通过碘化丙啶(PI)和台酚蓝染色、以及RT-qPCR分子定量,共同表明砖红镰刀菌可以在马铃薯根系内生定殖,同时对真菌在植株中生长量进行了相对定量。在根表皮、根皮层细胞发现砖红镰刀菌菌丝的生长,并向上生长到达植物的茎部,进一步明确了菌株的作用部位。6.砖红镰刀菌增强马铃薯根际土壤硫酸酯酶活性,提高了根际土壤的活力。
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