【摘 要】
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联合应用表型测定和PCR 技术判定屎肠球菌AS1.2025 具有产生enterocin A 的能力,并从其染色体DNA 中克隆到包含结构基因在内的三种enterocin A 合成相关基因。成功构建了三种
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联合应用表型测定和PCR 技术判定屎肠球菌AS1.2025 具有产生enterocin A 的能力,并从其染色体DNA 中克隆到包含结构基因在内的三种enterocin A 合成相关基因。成功构建了三种enterocin A 重组表达质粒,表达的MBP-enterocin A、GST-enterocin A 及His-tag-enterocin A 呈现抗李斯特氏菌活性。进行了MBP-enterocin A 和His-tag-enterocin A 的抑菌谱、稳定性及作用模式的研究,结果表明,环境因素如温度和pH 值及化学物质如蛋白酶和还原剂均不同程度影响重组enterocin A 的活性;重组enterocin A 表现特异的抗李斯特氏菌活性和杀菌的作用模式。通过PCR 突变技术成功构建了5种MBP-enterocin A突变体重组表达质粒,并对MBP-enterocin A及其突变体的抑菌活性进行比较分析,结果表明:二硫键为重组enterocin A 活性的关键因素,而亮氨酸不为活性的关键氨基酸;enterocin A 的N-端氨基酸序列为活性的关键因素,并也表明了enterocin A 前体也具有活性。
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