论文部分内容阅读
目的:观察淋巴细胞功能相关抗原1基因缺失(LFA-1-/-)对初始T细胞(na(i)ve T)体外诱导的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(iTreg)的生成和抑制功能的影响。 方法:采用LFA-1-/-（实验组）及野生型（对照组）C57/B6小鼠，免疫磁珠分选小鼠脾脏CD4+CD62L+na(i)ve T细胞并检测分选细胞纯度，分选后na(i)ve T细胞体外经固相包被抗体小鼠CD3单抗、CD28单抗和小鼠重组可溶性细胞因子IL-2，重组人TGF-β诱导分化因素作用下37℃含5％CO2温箱培养90-108h，流式检测iTreg细胞比率，荧光定量PCR检测转录因子Foxp3mRAN的表达。两组诱导出的iTreg细胞体外分别与磁珠分选后CFSE染色的同种异型基因小鼠的CD4+T细胞以1∶1比例混合培养，以不加iTreg的CD4+T细胞组作为抑制空白组，培养48-72h流式检测三组培养体系中CD4+T细胞的增殖水平，以CD4+T细胞的平均荧光强度几何均数作为检测及统计指标。同时收集培养结束后细胞上清，ELISA检测细胞因子IL-10的水平。 结果:磁珠分选na(i)ve T和CD4+T细胞纯度较高，分选出的na(i)ve T细胞能成功诱导出iTreg细胞，LFA-1-/-小鼠na(i)ve T诱导分化的iTreg细胞比率下降，其特异性转录因子Foxp3mRNA表达降低。野生组、LFA-1-/-组和空白组的小鼠CD4+效应T细胞增殖水平间存在统计学意义，其中流式检测野生型、LFA-1-/-组CD4+效应T细胞增殖均低于空白组，两两比较具有统计学差异，流式检测LFA-1-/-组CD4+效应T细胞的增殖水平略高于野生组效应CD4+T细胞，但无明显统计学差异。三组间细胞因子IL-10的表达存在差异，两两比较也具有统计学差异，其中LFA-1-/-组IL-10活性最高，空白组最低。 结论:LFA-1基因缺失影响小鼠na(i)ve T体外生成iTreg细胞，IL-10参与了iTreg对同种异型基因鼠CD4+T细胞的增殖抑制作用过程，但LFA-1基因缺失对iTreg体外抑制功能的影响及其机制尚需要进一步明确。