茯苓多糖在貂源肺炎克雷伯菌菌毛粘附蛋白黏膜免疫中的佐剂效应

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肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae)是人和动物呼吸道、消化道的条件致病菌。菌毛是肺炎克雷伯菌的重要致病因子,其通过菌毛尖端粘附素(adhesin)的粘附作用定植在宿主黏膜表面继而进行感染。黏膜是机体抵抗病原体入侵的第一道屏障,由黏膜进行免疫接种可有效诱导局部和全身免疫应答。而绝大多数抗原经黏膜供给时免疫原性弱且应答持续时间短,因此,一种高效、安全、无副作用的黏膜佐剂对于黏膜免疫十分重要。多糖是生命有机体的重要组成成分,具有多种生物学功能,其中最主要的是免疫调节作用。肠道黏膜是口服多糖发挥局部免疫调节作用从而影响整体免疫的主要场所。多糖的副作用小,不易产生耐受,将其开发为新型佐剂,具有十分广阔的应用前景。首先,本研究采用分子生物学技术在大肠杆菌BL21Codon Plus(DE3)中成功诱导表达肺炎克雷伯氏菌Ⅰ型菌毛粘附蛋白K(fimK),并以fimK作为抗原制备多克隆抗体。然后对茯苓多糖(Pachymaran)和枸杞多糖(lyciumbarbarum polysaccharides)对免疫抑制小鼠的免疫增强和肠道黏膜免疫调节作用进行研究,结果显示,两种多糖均可提高免疫抑制小鼠脾脏指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬功能,调节免疫抑制小鼠脾脏CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞亚群比例及肠派氏结T、B淋巴细胞比例和血清及小肠组织中IL-12、IL-4、IFN-γ细胞因子水平。证明枸杞多糖和茯苓多糖均对免疫抑制小鼠具有免疫增强作用,并对肠道黏膜系统具有免疫调节作用,且茯苓多糖的免疫调节效应显著优于枸杞多糖。进一步探讨多糖在黏膜免疫中的佐剂效果,本研究制备了PLGA包裹fimK微球作为口服免疫的抗原并以茯苓多糖作为黏膜佐剂进行免疫,并通过肺炎克雷伯菌攻毒保护性实验,评价疫苗的保护效力。结果显示,多糖佐剂组血清特异性IgG、肠黏膜特异性IgA水平均显著高于其他组,能够显著增强体液免疫应答。通过检测脾脏和肠派氏结CD3+CD4+/CD3+CD8+淋巴细胞比例和血清及肠组织中IFN-γ和IL-4细胞因子水平,显示CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比值显著增大,提示机体免疫应答主要是CD4+表型T细胞辅助参与调节,同时IL-4细胞因子水平显著升高,提示茯苓多糖为佐剂诱导的免疫应答偏向Th2型,并能够对小鼠在致死性肺炎克雷伯菌株攻毒中起到保护作用。本研究探讨了茯苓多糖在貂源肺炎克雷伯菌菌毛粘附蛋白黏膜免疫中的佐剂效应,结果显示茯苓多糖能够增强小鼠局部黏膜免疫应答和系统免疫反应,并对致死性肺炎克雷伯菌株的攻毒具有保护作用。表明了茯苓多糖作为免疫增强剂具有开发为黏膜佐剂的潜力。
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